Materials and Methods

Experimental location and climatic characteristics. The work was carried out at the UEB Antonio Maceo, which is located on the Manzanillo highway km 12, in the town of La William Soler, Bayamo municipality, Granma province, Cuba. Mean relative humidity was 78 %, mean minimum temperature was 26.3 °C and mean maximum temperature was 30.6 °C.

Sample taking and preparing. An amount of 20 kg of leaves of P. guajava, A. occidentale, M. oleifera and M. citrifolia were collected from 20 trees approximately five years old in the peri-urban areas of Bayamo municipality, Granma. This territory is characterized by a flat topography and brown carbonated soil. Size diversity, structure and optimal classification of leaves were features considered for the collection, and were identified in the Department of Botany of the Faculty of Agricultural Sciences of the University of Granma, Cuba.

The leaves were dehydrated for seven days in the shade, on perforated cardboard sheets and removed twice a day. Then, they were placed in an oven (WSU 400, Germany) with air recirculation for 1 h at 60 °C. They were ground in a hammer mill with parallel blades, at 1 mm of size. Samples were stored at room temperature (26 ± 2 °C) in amber bottles to avoid decomposition of the active substances due to light. To prepare the mixed powder, the dry product obtained from leaves was taken and 40 % of A. occidentale, 20 % of P. guajava, 20 % of M. oleifera and 20 % of M. citrifolia were mixed, according to the results of the phytochemical screening performed by Más et al. (2017)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, B., Pupo, G., Rosabal, O. & Olmo, G. 2017. "Análisis preliminar de los metabolitos secundarios de polvos mixtos de hojas de plantas medicinales". Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-9, ISSN: 1028-4796..

Diets, animals and treatments. A total of 120 White Leghorn laying hens (Hybrid L-33), 27 weeks of age, were placed, for 10 weeks, according to a completely randomized design with three treatments, 10 repetitions per treatment and four animals per repetition. The experimental treatments consisted of a basal diet (T1) and the addition of 0.5 (T2) and 1.0 % (T3) of mixed powder of leaves of medicinal plants (40 % A. occidentale, 20 % P. guajava, 20 % of M. oleifera and 20 % of M. citrifolia). The results of Rosabal et al. (2017)Rosabal, O., Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G., Olmo, C. & Más, D. 2017. Efecto fitobiótico del polvo de hojas de Anacardium occidentale L. en las dietas de gallinas ponedoras. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-12, ISSN: 1028-4796. and Aroche et al. (2018)Aroche, R., Martínez, Y., Ruan, Z., Guan, G., Waititu, S., Nyachoti, C. M., Más, D. & Shile L. 2018. "Dietary inclusion of a mixed powder of medicinal plant leaves enhances the feed efficiency and immune function in broiler chickens". Journal of Chemistry, 2018(394): 1-6, ISSN: 2090-9071. https://doi.org/10.1155/2018/4073068. were considered to select the addition levels of mixed medicinal plant powder. In addition, the nutritional requirements recommended by UECAN (2007)UECAN (Unión de Empresas del Centro Avícola Nacional). 2007. Aportes de los piensos avícolas. Ed. Ministerio de la Agricultura. La Habana, Cuba. were used for formulating the basal diet (table 1).

Experimental conditions. The experimental unit consisted of a 40 x 40 cm metal cage, where four hens were housed. The animals received 110 g of feed/hen/day. Water was supplied ad libitum through a nipple per cage and 16 hours of lighting was provided each day. The experiment had an adaptation of 14 d (Martínez et al. 2012Martínez, Y., Escalona, A., Martínez, O., Olmo, C., Rodríguez, R., Iser, M., Betancur, C., Valdivié, M. & Liu, G. 2012. "The use of Anacardium occidentale as nutraceutical in hypoprotein diets for laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 46(4): 395-401, ISSN: 2079-3480.). During the experimental stage, the birds were not given any medication or therapeutic veterinary care.

Productive indicators. Laying hens were weighed individually at 27 and 37 weeks of age on a SARTORIUS digital scale, BL 1500 model, with precision ± 0.10 g. Egg weight was recorded weekly at 25 eggs/treatment, between 8:30 to 9:30 a.m. and mean weight was calculated. To determine laying intensity, total egg production/week/treatment was considered and one egg/day/housed bird was assumed as 100 %. Mass conversion was calculated considering the feed consumed, egg weight per repetition and the number of laid eggs. Viability of hens was computed at the end of the experiment. The percentage of unsuitable eggs (cracked, shell-less, broken and dirty eggs) was calculated by the formula:

External and internal quality of eggs. In week 37, 30 eggs/treatment were sampled to determine their external and internal quality indicators. Egg weight was determined with an OHAUS^® (China) digital scale, with ± 0.01 g of precision.

The following formula was used for calculating shape index (SI):

To measure shell thickness at the equator and at upper and lower poles of the egg, a Russian-made caliper was used, with an accuracy of ± 0.01mm. Shell surface was determined by Carter's (1975)Carter T.C. 1975. "The hen´s egg: Estimation of shell superficial area and egg volume using measurement of fresh egg weight and breadth alone or in combination". British Poultry Science, 16: 541-543, ISSN: 1466-1799. https://doi.org/10.1080/00071667508416224. formula:

Albumin and yolk height was measured with a height caliper with an accuracy of ± 0.01 mm. Yolk color was determined by Roche color fan of 15 colors (Odunsi 2003Odunsi, A.A. 2003. Assessment of Lablab (Lablab purpureus) leaf meal as a feed ingredient and yolk colouring agent in the diet of layers. International Journal of Poultry Science, 2(1):71-74. ISSN: 1682-8356. https://citeseerx.ist.psu.edu/document?repid=rep1&type=pdf&doi=484feebc56b8f970f0acc27e4d75a7f6bdd45758 ). The records of Haugh units (HU) were calculated by the relationship between egg weight (W) and albumin height (H) using the formula: (Rosabal et al. 2017Rosabal, O., Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G., Olmo, C. & Más, D. 2017. Efecto fitobiótico del polvo de hojas de Anacardium occidentale L. en las dietas de gallinas ponedoras. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-12, ISSN: 1028-4796.)

Statistical analysis. Data was processed using simple classification analysis of variance (ANOVA), in a completely randomized design. In necessary cases, Duncan (1955)Duncan, B. 1955. "Multiple ranges and multiple F test". Biometrics, 11(3): 1-42, ISSN: 1541-0420. https://doi.org/10.2307/3001478. test was applied to determine multiple differences between means, according to the SPSS version 23.0 statistical program. The percentage of unsuitable eggs (cracked, dirty, broken and egg-shell) was analyzed by comparison of proportions using the COMPARPRO 1.0 program (Font et al. 2007Font, H., Noda, A., Torres, V., Herrera, M., Lizazo, D., Sarduy, L. & Rodríguez, L. 2007. “COMPARPRO: Comparación de Proporciones, Versión: 1.0”. Departamento de Biomatemática, Instituto de Ciencia Animal, San José de las Lajas, Mayabeque, Cuba.).

Results and Discussion

Table 2 shows the effect of mixed leaf powder of A. occidentale (40 %), P. guajava (20 %), M. citrifolia (20 %) and M. oleifera (20 %) on the growth performance of laying hens. (27 to 37 weeks). Viability, body weight (initial and final), egg weight and dirty and shelled eggs did not show differences (P>0.05) among experimental treatments. However, the addition of 1.0 % of the mixed powder of medicinal plant decreased the percentage of cracked eggs and improved laying intensity and mass conversion (P<0.05) compared to the other treatments. The birds, in all treatments, consumed 100 % of the feed provided and no broken eggs were found.

Poultry viability (100 %) demonstrated the safety of mixed powder used during the 70 experimental days. Similar results were reported by Martínez et al. (2020)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480., Rabelo-Ruiz et al. (2021)Rabelo-Ruiz, M., Ariza-Romero, J. J., Zurita-González, M.J., Martín-Platero, A.M., Baños, A., Maqueda, M. & Peralta-Sánchez, J.M. 2021. Allium-based phytobiotic enhances egg production in laying hens through microbial composition changes in ileum and cecum. Animals, 11(2): 448, ISSN: 2076-2615. https://doi.org/10.3390/ani11020448. and Ruesga-Gutiérrez et al. (2022)Ruesga-Gutiérrez, E., Ruvalcaba-Gómez, J. M., Gómez-Godínez, L.J., Villagrán, Z., Gómez-Rodríguez, V.M., Heredia-Nava, D. & Arteaga-Garibay, R.I. 2022. Allium-based phytobiotic for laying hens’ supplementation: effects on productivity, egg quality, and fecal microbiota. Microorganisms, 10(1): 117, ISSN: 2076-2607. https://doi.org/10.3390/microorganisms10010117., who demonstrated that phytobiotic additives used in small concentrations do not cause morbidity and mortality in birds. Likewise, increasing levels of the medicinal mixed powder did not modify feed intake, previously verified by Más et al. (2015)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. and Rosabal et al. (2017)Rosabal, O., Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G., Olmo, C. & Más, D. 2017. Efecto fitobiótico del polvo de hojas de Anacardium occidentale L. en las dietas de gallinas ponedoras. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-12, ISSN: 1028-4796. when they used up to 1.0 % of the leaf powder of A. occidentale and M. citrifolia, respectively in the diets for laying hens.

Likewise, the results of hen weight, egg weight and the percentage of shell-less and dirty eggs could be due to the fact that the secondary metabolites of the plants for the mixed powder did not cause symptoms related to anti-nutritional factors (table 2). As reported by Savón et al. (2007)Savón, L., Scull, I. & Martínez, M. 2007. Integral foliage meals of three tropical legumes for poultry feeding. Chemical composition, physical properties and phytochemical screening. Cuban Journal of Agricultural Science, 41(1): 359-341, ISSN: 2079-3480. and Ni et al. (2016)Ni, H., Martínez, Y., Guan, G., Rodríguez, R., Más, D. & Liu, G. 2016. "Analysis of the impact of isoquinoline alkaloids, derived from Macleaya cordata extract, on the development and innate immune reaction in swine and poultry". BioMed Research International, 2016(11): 1-7, ISSN: 2314-6133. https://doi.org/10.1155/2016/1352146. an excess of anti-nutritional factors can decrease body weight, productive behavior, absorption of amino acids (mainly sulfur) and shell thickness. However, the mixed powder of medicinal plants (1 %) reduced cracked eggs by 0.14 % compared to the control (table 2). Mosayyeb et al. (2023)Mosayyeb, A., Mirghelenj, S.A., Hasanlou, P. & Shakouri Alishah, H. 2023. "Effects of pennyroyal (Mentha pulegium L.) supplementation on production performance, egg quality traits, and biochemical parameters of blood and egg in laying hens at later stages of the production period". Veterinary Medicine and Science, 9(1): 242-251, ISSN: 2053-1095. https://doi.org/10.1002/vms3.1031. found a lower percentage of unsuitable eggs when using phytobiotics in the diets of laying hens. These authors inferred that this effect was a result of the improvement of intestinal health and nutrient absorption.

Laying intensity increased (P<0.05) with the supplementation of 1.0 % of the medicinal mixed powder, demonstrating that small concentrations of these medicinal powders, rich in secondary metabolites, promote egg production (5.35 %) in hens at full peak. of posture. In this sense, Más et al. (2017)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, B., Pupo, G., Rosabal, O. & Olmo, G. 2017. "Análisis preliminar de los metabolitos secundarios de polvos mixtos de hojas de plantas medicinales". Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-9, ISSN: 1028-4796. identified metabolites responsible for biological activity such as triterpenes, steroids, saponins, coumarins, quinones and anthocyanidins in the mixture of A. occidentale (40 %), P. guajava (20 %), M. oleifera (20 %) and M. citrifolia (20 %).

Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. reported that inclusion of 1.0 % of the mixture of P. guajava (40 %), M. oleifera (20 %), A. occidentale (20 %) and M. citrifolia (20 %) increased egg production at 3.75%, although without modifying the other productive indicators. Kong et al. (2006)Kong, X. F., Hu, Y.L., Yin, Y.L., Wu, G.Y., Rui, R., Wang, D.Y. & Yang, C.B. 2006. "Chinese herbal ingredients are effective immune stimulators for chickens infected with the Newcastle disease virus". Poultry Science, 85(12): 2169-2175, ISSN: 0032-5791. https://doi.org/10.1093/ps/85.12.2169. found that the dietary use of a mixture of several Chinese medicinal plants improved productivity and immune status of broilers, the authors demonstrated the synergy of the chemical compounds in this phytobiotic product researched. Likewise, Chen et al. (2003)Chen, H.L., Li, D.F., Chang, B.Y., Gong, L.M., Dai, J.G. & Yi, G.F. 2003. "Effects of Chinese herbal polysaccharides on the immunity and growth performance of young broilers". Poultry Science, 82(3): 364-370, ISSN: 0032-5791. https://doi.org/10.1093/ps/82.3.364. reported that the mixture of medicinal plants (synergistic effect) improved cellular immunity and productivity in fast-growing birds. It should be considered that the secondary metabolites identified in the leaves of the medicinal mixed powder have antioxidant, anti-inflammatory and antimicrobial properties (Rafeeq et al. 2023Rafeeq, M., Bilal, R.M., Batool, F., Yameen, K., Farag, M.R., Madkour, M. & Alagawany, M. 2023. Application of herbs and their derivatives in broiler chickens: a review. World's Poultry Science Journal, 79(1): 1-23, ISSN: 0043-9339. https://doi.org/10.1080/00439339.2022.2151395.), which had a positive effect on animal response.

Also, the inclusion of 1.0 % of the mixed powder of medicinal plants promoted productive efficiency (mass conversion), due to the increase in egg production, with equal feed intake among treatments (table 2). According to Hidayat et al. (2021)Hidayat, R., Yunianto, V. D., Sukamto, B. & Sugiharto, S. 2021. "Effect of dietary supplementation of probiotic, phytobiotics or their combination on performance, blood indices and jejunal morphology of laying hens during post peak production". Online Journal of Animal and Feed Research, 11(1): 8-12, ISSN: 2228-7701. https://dx.doi.org/10.51227/ojafr.2021.2., extracts or bioactive compounds from plants used in animal feed have an anti-inflammatory and antimicrobial effect, which modifies intestinal permeability and villi structure and, consequently, increases productive efficiency of birds.

Saleh et al. (2019)Saleh, A.A., Kirrella, A. A., Dawood, M. A. & Ebeid, T. A. 2019. Effect of dietary inclusion of cumin seed oil on the performance, egg quality, immune response and ovarian development in laying hens under high ambient temperature. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 103(6): 1810-1817, ISSN: 1439-0396. https://doi.org/10.1111/jpn.13206. recommended the use of phytochemical products to improve productivity, immune activity and ovarian development in laying hens. However, Ghasemi et al. (2010)Ghasemi, R., Zarei, M. & Torki, M. 2010. "Adding medicinal herbs including garlic (Allium sativum) and thyme (Thymus vulgaris) to diet of laying hens and evaluating productive performance and egg quality characteristics". American Journal of Animal and Veterinary Sciences, 5(2): 151-154, ISSN: 1557-4563. https://doi.org/10.3844/ajavsp.2010.151.154. found no changes in mass conversion when they used a mixture of garlic and thymol.

Table 3 shows that the experimental diets did not modify (P>0.05) the external and internal quality of eggs of laying hens (37 weeks). According to Martínez et al. (2020)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480., different effects can be elucidated when medicinal plants are used orally, because it will depend on the chemical structure of secondary metabolites, their concentration and addition level in poultry diets. Thus, eggshell thickness and surface area did not change due to the effect of experimental diets (P>0.05). This shows that the phytobiotic used up to 1.0 % does not affect the absorption of calcium, phosphorus or other minerals. However, studies by Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. showed that the inclusion of 1.0 % of a medicinal mixed powder increased eggshell thickness in laying hens.

The secondary metabolites present in the medicinal mixed powder did not modify (P>0.05) the albumin height and the Haugh units (table 3). This structure of the egg depends on the balance of amino acids to form albumin proteins, such as albumin, conalbumin, ovomucin and lysozyme.

The deficiency of essential amino acids reduces albumin height and Haugh units (Ullah et al. 2022Ullah, S., Ditta, Y.A., King, A. J., Pasha, T.N., Mahmud, A. & Majeed, K.A. 2022. Varying isoleucine level to determine effects on performance, egg quality, serum biochemistry, and ileal protein digestibility in diets of young laying hens. PloS One, 17(1): e0261159, ISSN: 1932-6203. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0261159.). Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. and Martínez et al. (2022)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480. found no changes in albumen height and Haugh units when they used up to 1.0 % of a mixed powder of medicinal plants and P. guajava leaf powder in laying hens, respectively. The groups with the phytobiotic did not modify yolk height, apparently, the secondary metabolites to make up the medicinal powder did not alter the metabolism of lipids, rich in this structure of the egg, although other studies are necessary to verify this hypothesis. Other experiments with phytobiotics in hens indicated a similar effect (Más et al. 2015Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. and Salazar et al. 2017Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920.).

This phytobiotic derived from a mixture of medicinal plants did not modify yolk color. All experimental groups indicated the same feed intake and, therefore, of yellow corn, rich in zeaxanthin (tables 1 and 2), as the main pigment in the diet (Calvo-Brenes and O'Hare 2020Calvo-Brenes, P. & O´Hare, T. 2020. "Effect of freezing and cool storage on carotenoid content and quality of zeaxanthin-biofortified and standard yellow sweet-corn (Zea mays L.)". Journal of Food Composition and Analysis, 86(3): 103353, ISSN: 0889-1575. https://doi.org/10.1016/j.jfca.2019.103353.). However, Más et al. (2015)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. reported that the supplementation of A. occidentale and M. citrifolia leaf powder pigmented the egg yolk, compared to the control treatment, due to the presence of anthocyanidins. Apparently, the low level of inclusion of these medicinal plants in the mixture, or perhaps a possible antagonism of several secondary metabolites in the mixed powder, inhibited the action of this natural dye. Other studies are necessary to elucidate this possible antagonism.

Conclusions

It is concluded that the addition of 1 % of mixed powder of medicinal plants in diets for laying hens improves the growth performance such as laying intensity and mass conversion and decreases the percentage of cracked eggs without affecting egg quality.

Materiales y Métodos

Ubicación experimental y características climáticas. El trabajo se realizó en la UEB Antonio Maceo, que se localiza en la carretera Manzanillo km 12, en la localidad de La William Soler, municipio Bayamo, provincia de Granma, Cuba. La humedad relativa media fue de 78 %, la temperatura mínima promedio de 26.3 °C y la temperatura máxima promedio de 30.6 °C.

Toma y preparación de las muestras. Se recolectaron 20 kg de hojas de P. guajava, A. occidentale, M. oleifera y M. citrifolia, de 20 árboles de aproximadamente cinco años de edad en las zonas periurbanas del municipio Bayamo, Granma. Este territorio se caracteriza por una topografía llana y suelo pardo con carbonato. Se tuvo en cuenta para la recolección, la diversidad del tamaño, estructura y la clasificación óptima de las hojas, identificadas en el Departamento de Botánica de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad de Granma, Cuba.

Las hojas se deshidrataron durante siete días a la sombra, en planchas de cartón perforadas y se removieron dos veces por día. Seguidamente se depositaron en una estufa (WSU 400, Alemania) con recirculación de aire durante 1 h a 60 (C. Luego se trituraron en un molino de martillo de cuchillas paralelas, a 1 mm de tamaño de partículas. Las muestras se conservaron a temperatura ambiente (26 ± 2 (C) en frascos ámbar para evitar la descomposición de las sustancias activas por acción de la luz. Para la elaboración del polvo mixto se tomó el producto seco obtenido de las hojas y se mezcló 40 % de A. occidentale, 20 % de P. guajava, 20 % de M. oleifera y 20 % de M. citrifolia, según los resultados del tamizaje fitoquímico realizado por Más et al. (2017)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, B., Pupo, G., Rosabal, O. & Olmo, G. 2017. "Análisis preliminar de los metabolitos secundarios de polvos mixtos de hojas de plantas medicinales". Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-9, ISSN: 1028-4796..

Dietas, animales y tratamientos. Un total de 120 gallinas ponedoras White Leghorn (Híbrido L-₃₃) de 27 semanas de edad, se ubicaron durante 10 semanas, según diseño totalmente aleatorizado con tres tratamientos, 10 repeticiones por tratamiento y cuatro aves por repetición. Los tratamientos experimentales consistieron en una dieta basal (T1) y la adición de 0.5 (T2) y 1.0 % (T3) del polvo mixto de hojas de plantas medicinales (40 % de A. occidentale, 20 % de P. guajava, 20 % de M. oleifera y 20 % de M. citrifolia). Se consideraron los resultados de Rosabal et al. (2017)Rosabal, O., Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G., Olmo, C. & Más, D. 2017. Efecto fitobiótico del polvo de hojas de Anacardium occidentale L. en las dietas de gallinas ponedoras. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-12, ISSN: 1028-4796. y Aroche et al. (2018)Aroche, R., Martínez, Y., Ruan, Z., Guan, G., Waititu, S., Nyachoti, C. M., Más, D. & Shile L. 2018. "Dietary inclusion of a mixed powder of medicinal plant leaves enhances the feed efficiency and immune function in broiler chickens". Journal of Chemistry, 2018(394): 1-6, ISSN: 2090-9071. https://doi.org/10.1155/2018/4073068. para seleccionar los niveles de adición del polvo mixto de plantas medicinales. Además, se utilizaron los requerimientos nutricionales recomendados por la UECAN (2007)UECAN (Unión de Empresas del Centro Avícola Nacional). 2007. Aportes de los piensos avícolas. Ed. Ministerio de la Agricultura. La Habana, Cuba. para formular la dieta basal (tabla 1).

Condiciones experimentales. La unidad experimental consistió en una jaula metálica de 40 x 40 cm, donde se alojaron cuatro gallinas. Las aves recibieron 110 g de alimento/gallina/día. El agua se suministró ad libitum a través de un niple/jaula y se ofertó 16 horas de iluminación cada día. El experimento tuvo una adaptación de 14 d (Martínez et al. 2012Martínez, Y., Escalona, A., Martínez, O., Olmo, C., Rodríguez, R., Iser, M., Betancur, C., Valdivié, M. & Liu, G. 2012. "The use of Anacardium occidentale as nutraceutical in hypoprotein diets for laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 46(4): 395-401, ISSN: 2079-3480.). Durante la etapa experimental, las aves no recibieron ningún medicamento ni atención veterinaria terapéutica.

Indicadores productivos. Las gallinas ponedoras se pesaron de forma individual a las 27 y 37 semanas de edad en una balanza digital SARTORIUS, modelo BL 1500, con precisión ± 0.10 g. El peso del huevo se registró semanalmente a 25 huevos/tratamiento, entre las 8:30 a 9:30 a.m. y se calculó el peso promedio. Para determinar la intensidad de puesta, se consideró la producción total de huevos/semana/tratamiento y se asumió como 100 % un huevo/día/ave alojada. La conversión masal se calculó teniendo en cuenta el alimento consumido, peso del huevo por repetición y el número de huevos puestos. Se computó la viabilidad de las aves al finalizar el experimento. El porcentaje de los huevos no aptos (cascados, fárfara, rotos y sucios) se calculó por la fórmula:

Calidad externa e interna del huevo. En la semana 37 se muestrearon 30 huevos/tratamiento para determinar los indicadores de calidad externa e interna del huevo. El peso del huevo se determinó con una balanza digital OHAUS® (China), con precisión de ± 0.01 g.

Para calcular el índice de forma (IF), se utilizó la fórmula:

Para medir el grosor de la cáscara en el ecuador y en los polos del huevo, superior e inferior, se utilizó un pie de rey de fabricación rusa, con precisión de ± 0.01 mm. La superficie de la cáscara se determinó por la fórmula de Carter (1975Carter T.C. 1975. "The hen´s egg: Estimation of shell superficial area and egg volume using measurement of fresh egg weight and breadth alone or in combination". British Poultry Science, 16: 541-543, ISSN: 1466-1799. https://doi.org/10.1080/00071667508416224.):

La altura de la clara densa y de la yema se midió con un calibrador de altura con una exactitud de ± 0.01 mm. El color de la yema se determinó por el abanico de Roche de 15 colores (Odunsi 2003Odunsi, A.A. 2003. Assessment of Lablab (Lablab purpureus) leaf meal as a feed ingredient and yolk colouring agent in the diet of layers. International Journal of Poultry Science, 2(1):71-74. ISSN: 1682-8356. https://citeseerx.ist.psu.edu/document?repid=rep1&type=pdf&doi=484feebc56b8f970f0acc27e4d75a7f6bdd45758 ). Los registros de las unidades Haugh (UH) se calcularon por la relación entre el peso del huevo (W) y la altura de la clara densa (H) mediante la fórmula:

Análisis estadísticos. Los datos se procesaron mediante análisis de varianza (ANOVA) de clasificación simple, en un diseño totalmente aleatorizado. En los casos necesarios, se aplicó la dócima de Duncan (1955)Duncan, B. 1955. "Multiple ranges and multiple F test". Biometrics, 11(3): 1-42, ISSN: 1541-0420. https://doi.org/10.2307/3001478. para determinar las diferencias múltiples entre medias, según el programa estadístico SPSS versión 23.0. El porcentaje de huevos no aptos (cascados, rotos sucios y en fárfara) se analizó por comparación de proporciones mediante el programa COMPARPRO 1.0 (Font et al. 2007Font, H., Noda, A., Torres, V., Herrera, M., Lizazo, D., Sarduy, L. & Rodríguez, L. 2007. “COMPARPRO: Comparación de Proporciones, Versión: 1.0”. Departamento de Biomatemática, Instituto de Ciencia Animal, San José de las Lajas, Mayabeque, Cuba.).

Resultados y discusión

La tabla 2 muestra el efecto del polvo mixto de hojas de A. occidentale (40 %), P. guajava (20 %), M. citrifolia (20 %) y M. oleifera (20 %) en el comportamiento productivo de gallinas ponedoras (27 a 37 semanas). La viabilidad, peso vivo (inicial y final), peso del huevo y los huevos sucios y en fárfara no mostraron diferencias (P>0.05) entre los tratamientos experimentales. Sin embargo, la adición de 1.0 % del polvo mixto de plantas medicinales disminuyó el porcentaje de huevos cascados y mejoró la intensidad de puesta y la conversión masal (P<0.05) comparado con los otros tratamientos. Las aves en todos los tratamientos consumieron 100 % del alimento suministrado y no se encontraron huevos rotos.

La viabilidad de las aves (100 %) demostró la inocuidad del polvo mixto empleado durante los 70 d experimentales. Similares resultados informaron Martínez et al. (2020)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480., Rabelo-Ruiz et al. (2021)Rabelo-Ruiz, M., Ariza-Romero, J. J., Zurita-González, M.J., Martín-Platero, A.M., Baños, A., Maqueda, M. & Peralta-Sánchez, J.M. 2021. Allium-based phytobiotic enhances egg production in laying hens through microbial composition changes in ileum and cecum. Animals, 11(2): 448, ISSN: 2076-2615. https://doi.org/10.3390/ani11020448. y Ruesga-Gutiérrez et al. (2022)Ruesga-Gutiérrez, E., Ruvalcaba-Gómez, J. M., Gómez-Godínez, L.J., Villagrán, Z., Gómez-Rodríguez, V.M., Heredia-Nava, D. & Arteaga-Garibay, R.I. 2022. Allium-based phytobiotic for laying hens’ supplementation: effects on productivity, egg quality, and fecal microbiota. Microorganisms, 10(1): 117, ISSN: 2076-2607. https://doi.org/10.3390/microorganisms10010117., quienes informaron que los aditivos fitobióticos utilizados en pequeñas concentraciones no provocan morbimortalidad en las aves. Asimismo, los niveles crecientes del polvo mixto medicinal no modificaron el consumo de alimento, anteriormente comprobado por Más et al. (2015)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. y Rosabal et al. (2017)Rosabal, O., Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G., Olmo, C. & Más, D. 2017. Efecto fitobiótico del polvo de hojas de Anacardium occidentale L. en las dietas de gallinas ponedoras. Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-12, ISSN: 1028-4796. cuando utilizaron hasta 1.0 % del polvo de hojas de A. occidentale y M. citrifolia, respectivamente en las dietas para gallinas ponedoras.

De igual forma, los resultados del peso de las aves, peso del huevo y los huevos rotos, sucios y en fárfara se podrían deber a que los metabolitos secundarios de las plantas para conformar el polvo mixto, no provocaron síntomas relacionados con factores antinutricionales (tabla 2). Según lo informado por Savón et al. (2007)Savón, L., Scull, I. & Martínez, M. 2007. Integral foliage meals of three tropical legumes for poultry feeding. Chemical composition, physical properties and phytochemical screening. Cuban Journal of Agricultural Science, 41(1): 359-341, ISSN: 2079-3480. y Ni et al. (2016)Ni, H., Martínez, Y., Guan, G., Rodríguez, R., Más, D. & Liu, G. 2016. "Analysis of the impact of isoquinoline alkaloids, derived from Macleaya cordata extract, on the development and innate immune reaction in swine and poultry". BioMed Research International, 2016(11): 1-7, ISSN: 2314-6133. https://doi.org/10.1155/2016/1352146. un exceso de factores antinutricionales se puede disminuir el peso corporal, el comportamiento productivo, la absorción de aminoácidos (principalmente azufrados) y el grosor de la cáscara. No obstante, el polvo mixto de plantas medicinales (1.0 %) redujo los huevos cascados en 0.14 % con relación al control (tabla 2). Mosayyeb et al. (2023)Mosayyeb, A., Mirghelenj, S.A., Hasanlou, P. & Shakouri Alishah, H. 2023. "Effects of pennyroyal (Mentha pulegium L.) supplementation on production performance, egg quality traits, and biochemical parameters of blood and egg in laying hens at later stages of the production period". Veterinary Medicine and Science, 9(1): 242-251, ISSN: 2053-1095. https://doi.org/10.1002/vms3.1031. encontraron menor porcentaje de huevos no aptos al utilizar fitobióticos en las dietas de gallinas ponedoras. Estos autores justificaron dicho efecto al mejoramiento de la salud intestinal y la absorción de los nutrientes.

La intensidad de puesta incrementó (P<0.05) con la suplementación de 1.0 % del polvo mixto medicinal, lo que demuestra que pequeñas concentraciones de estos polvos medicinales ricos en metabolitos secundarios promueven la producción de huevos (5.35 %) en gallinas en pleno pico de postura. En este sentido, Más et al. (2017)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, B., Pupo, G., Rosabal, O. & Olmo, G. 2017. "Análisis preliminar de los metabolitos secundarios de polvos mixtos de hojas de plantas medicinales". Revista Cubana de Plantas Medicinales, 22(1): 1-9, ISSN: 1028-4796. identificaron en la mezcla de A. occidentale (40 %), P. guajava (20 %), M. oleifera (20 %) y M. citrifolia (20 %), metabolitos responsables de actividad biológica como triterpenos, esteroides, saponinas, cumarinas, quinonas y antocianidinas.

Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. informaron que la inclusión de 1.0 % de la mezcla de P. guajava (40 %), M. oleifera (20 %), A. occidentale (20 %) y M. citrifolia (20 %) incrementó la producción de huevos en 3.75 %, aunque sin modificar los otros indicadores productivos. Kong et al. (2006)Kong, X. F., Hu, Y.L., Yin, Y.L., Wu, G.Y., Rui, R., Wang, D.Y. & Yang, C.B. 2006. "Chinese herbal ingredients are effective immune stimulators for chickens infected with the Newcastle disease virus". Poultry Science, 85(12): 2169-2175, ISSN: 0032-5791. https://doi.org/10.1093/ps/85.12.2169. encontraron que el uso dietético de una mezcla de varias plantas medicinales chinas mejoró la productividad y el estatus inmune de los pollos de ceba, los autores demostraron la sinergia de los compuestos químicos en este producto fitobiótico investigado. Asimismo, Chen et al. (2003)Chen, H.L., Li, D.F., Chang, B.Y., Gong, L.M., Dai, J.G. & Yi, G.F. 2003. "Effects of Chinese herbal polysaccharides on the immunity and growth performance of young broilers". Poultry Science, 82(3): 364-370, ISSN: 0032-5791. https://doi.org/10.1093/ps/82.3.364. informaron que la mezcla de plantas medicinales (efecto sinérgico) mejoró la inmunidad celular y la productividad de aves de crecimiento rápido. Se debe considerar que los metabolitos secundarios identificados en las hojas del polvo mixto medicinal tienen propiedades antioxidantes, antiinflamatorios y antimicrobianas (Rafeeq et al. 2023Rafeeq, M., Bilal, R.M., Batool, F., Yameen, K., Farag, M.R., Madkour, M. & Alagawany, M. 2023. Application of herbs and their derivatives in broiler chickens: a review. World's Poultry Science Journal, 79(1): 1-23, ISSN: 0043-9339. https://doi.org/10.1080/00439339.2022.2151395.), lo que tuvo un efecto positivo en la respuesta animal.

La inclusión de 1.0 % del polvo mixto de plantas medicinales promovió la eficiencia productiva (conversión masal), debido al incremento de la producción de huevos, con igual consumo de alimento entre tratamientos (tabla 2). Según Hidayat et al. (2021)Hidayat, R., Yunianto, V. D., Sukamto, B. & Sugiharto, S. 2021. "Effect of dietary supplementation of probiotic, phytobiotics or their combination on performance, blood indices and jejunal morphology of laying hens during post peak production". Online Journal of Animal and Feed Research, 11(1): 8-12, ISSN: 2228-7701. https://dx.doi.org/10.51227/ojafr.2021.2., los extractos o compuestos bioactivos de plantas usadas en la alimentación animal tienen efecto antinflamatorio y antimicrobiano, lo que modifica la permeabilidad intestinal y la estructura de las vellosidades y por ende incrementa la eficiencia productiva de las aves.

Saleh et al. (2019)Saleh, A.A., Kirrella, A. A., Dawood, M. A. & Ebeid, T. A. 2019. Effect of dietary inclusion of cumin seed oil on the performance, egg quality, immune response and ovarian development in laying hens under high ambient temperature. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 103(6): 1810-1817, ISSN: 1439-0396. https://doi.org/10.1111/jpn.13206. recomendaron el empleo de productos fitoquímicos para mejorar la productividad, la actividad inmune y el desarrollo ovárico en gallinas ponedoras. Sin embargo, Ghasemi et al. (2010)Ghasemi, R., Zarei, M. & Torki, M. 2010. "Adding medicinal herbs including garlic (Allium sativum) and thyme (Thymus vulgaris) to diet of laying hens and evaluating productive performance and egg quality characteristics". American Journal of Animal and Veterinary Sciences, 5(2): 151-154, ISSN: 1557-4563. https://doi.org/10.3844/ajavsp.2010.151.154. no encontraron cambios en la conversión masal cuando utilizaron una mezcla de ajo y timol.

La tabla 3 muestra que las dietas experimentales no modificaron (P>0.05) la calidad externa e interna del huevo de gallinas ponedoras (37 semanas). Según Martínez et al. (2020)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480., diferentes efectos pueden ser dilucidados cuando se utilizan oralmente las plantas medicinales, porque dependerá de la estructura química de los metabolitos secundarios, su concentración y nivel de adición en las dietas de las aves. Así, el grosor y la superficie de la cáscara del huevo no cambió debido al efecto de las dietas experimentales (P>0.05). Esto demuestra que el fitobiótico utilizado hasta 1.0 % no afecta la absorción del calcio, fósforo u otros minerales. Sin embargo, estudios de Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. mostraron que la inclusión de 1.0 % de un polvo mixto medicinal incrementó el grosor de la cáscara del huevo de gallinas ponedoras.

Los metabolitos secundarios presentes en el polvo mixto medicinal no modificaron (P>0.05) la altura del albumen y las unidades Haugh (tabla 3). Esta estructura del huevo depende del equilibrio de los aminoácidos para formar las proteínas del albumen, como albúmina, conalbumina, ovomucina y lisozima.

El déficit de aminoácidos esenciales reduce la altura del albumen y las unidades Haugh (Ullah et al. 2022Ullah, S., Ditta, Y.A., King, A. J., Pasha, T.N., Mahmud, A. & Majeed, K.A. 2022. Varying isoleucine level to determine effects on performance, egg quality, serum biochemistry, and ileal protein digestibility in diets of young laying hens. PloS One, 17(1): e0261159, ISSN: 1932-6203. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0261159.). Salazar et al. (2017)Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920. y Martínez et al. (2022)Martínez, Y., Rodríguez, R., Pupo, G.E., Rosabal, O., Olmo, C. & Valdivié, M. 2020. "Phytobiotic effect of Psidium guajava leaves powder on egg productivity and quality of laying hens". Cuban Journal of Agricultural Science, 54(4): 1-12, ISSN: 2079-3480. no encontraron cambios en la altura del albumen y las unidades Haugh cuando utilizaron hasta 1.0 % de un polvo mixto de plantas medicinales y del polvo de hojas de P. guajava en gallinas ponedoras, respectivamente.

Los grupos con el fitobiótico no modificaron la altura de la yema, al parecer, los metabolitos secundarios en las plantas para conformar el polvo medicinal no alteraron el metabolismo de los lípidos, rico en esta estructura del huevo, aunque son necesarios otros estudios para comprobar esta hipótesis. Otros experimentos con fitobióticos en gallinas indicaron un efecto similar (Más et al. 2015Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. y Salazar et al. 2017Salazar, I., Martínez, Y., Rodríguez, R., Olmo, C., Aroche, R., Pupo, G., Rosabal, O. & Más, D. 2017. Efecto de la suplementación dietética con polvo mixto de plantas medicinales en la productividad y calidad del huevo de gallinas ponedoras. Revista de Producción Animal, 29(3): 1-5, ISSN: 2224-7920.).

Este fitobiótico derivado de una mezcla de plantas medicinales no modificó el color de la yema. Todos los grupos experimentales indicaron el mismo consumo de alimento y por ende de maíz amarrillo rico en zeaxantina (tablas 1 y 2), como el principal pigmentante de la dieta (Calvo-Brenes y O´Hare 2020Calvo-Brenes, P. & O´Hare, T. 2020. "Effect of freezing and cool storage on carotenoid content and quality of zeaxanthin-biofortified and standard yellow sweet-corn (Zea mays L.)". Journal of Food Composition and Analysis, 86(3): 103353, ISSN: 0889-1575. https://doi.org/10.1016/j.jfca.2019.103353.). Sin embargo, Más et al. (2015)Más, D., Martínez, Y., Rodríguez, R., Betancur, C. & Rosabal, O. 2015. "Effect of dietary supplementation with Morinda citrifolia on productivity and egg quality of laying hens". Ciencia y Agricultura, 12(2): 7-12, ISSN: 0122-8420. http://dx.doi.10.19053/01228420.4348. refirieron que la suplementación del polvo de hojas de A. occidentale y M. citrifolia pigmentó la yema del huevo, con respeto al tratamiento control, debido a la presencia de antocianidinas. Al parecer, el menor nivel de inclusión de estas plantas medicinales en la mezcla, o quizás un posible antagonismo de varios metabolitos secundarios en el polvo mixto, inhibió la acción de este colorante natural. Otros estudios son necesarios para dilucidar este efecto.

Conclusiones

Se concluye que la adición de 1.0 % del polvo mixto de plantas medicinales en dietas para gallinas ponedoras mejora la intensidad de puesta y la conversión masal y disminuye el porcentaje de huevos cascados, sin afectar la calidad externa e interna del huevo.