Location and study area. The research was carried out in Villa Lucero farm, at 0°35'25.6"N and 76°32'05.3"W, Putumayo department, in the southwest of the Republic of Colombia. This region is located at an altitude of 256 m.a.s.l. It has an average temperature of 25.3 ºC, with 85% of relative humidity and annual precipitation of 3,355 mm (IDEAM 2017Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales-IDEAM. 2017. Subdirección de Meteorología. Available: http://www.ideam.gov.co/web/atencion-y-participacion-ciudadana/publicaciones-ideam.). These characteristics correspond to a tropical humid forest life zone (Holdridge 1982Holdridge, L.R. 1982. "Determination of world plant formations from simple climatic data". Science, 105(2727): 367-368, ISSN: 1095-9203, DOI: https://doi.org/10.1126/science.105.2727.367.). Its soils are clayey-loam and clayey, acid (pH 4.6), low in phosphorus (<1.7 mg kg-1) and with high aluminum contents (>3.2 cmol kg-1) and iron (Landínez-Torres 2017Landínez-Torres, Y.Á. 2017. "Uso y manejo del suelo en la amazonía colombiana". Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 12(2): 151-163, ISSN: 1900-9607, DOI: http://dx.doi.org/10.21615/cesmvz.12.2.6.). During the sampling period, in the experimental stage, soil received no irrigation and plants were not fertilized.

Trichantera gigantea (Acanthaceae) and Piptocoma discolor (Asteraceae) species were used as forage, the latter native to the Amazon. They were harvested from a forage bank established on the farm with one-year-old plants, which underwent agronomic cutting management, and insect and weed control. An establishment cut was carried out and the regrowth of plants was used at 60 d. From each plot, 15 plants were taken in zigzag as a sample. Their leaves and young stems were used from 20 cm from the soil in the summer season, in June (Fick et al. 1976Fick, R., Miller, S. & Funk, D. 1976. Métodos de análisis de minerales para tejidos de plantas y animales. Animal Science Department, Center for Tropical Agriculture, University of Florida, Gainesville, Florida, U.S.A., p. 39.). Samples of fresh material were dried in an oven at 60°C for 48 hours and ground to reach 1 mm in a hammer mill. Later, three samples of 200 g were taken for analysis. Preparation, drying and weighing was carried out in the biotechnology, soil and water laboratory of SENA, Putumayo regional.

Animals. According to their genotypic evaluation, 12 Hartón del Valle pure cattle were selected, with an average weight of 340 ± 20 kg live weight. Body weights were recorded according to those estimated from the measurement of the thoracic perimeter with a tape measure, according to the methodology proposed by Álvarez (1997)Álvarez, J.L. 1997. "La condición corporal en la hembra bovina". Revista de Salud Animal, 19(1): 37-45, ISSN: 0253-570X.. For sanitary management, they were dewormed every three months and an annual vaccination plan was carried out to control reproductive diseases (IBR, DVB, and brucellosis), and others of mandatory registration in Colombia (foot-and-mouth disease and rabies).

Feeding. For the forage base diet, 6.0 ha of Brachiaria decumbens pasture were used, divided into 14 paddocks of 4.285 m2. The pasture was divided with electric fence according to average intake of 15% of live weight, according to capacity data, with a production of 0.450 kg/m2. Each paddock was divided in a uniform manner, according to the four-day occupation period, so that offered forage had the same regrowth age, of 56 d of rest, typical for this area. They underwent an adaptation period of 15 d. During the study, the animals remained in the assigned paddocks from 11:00 a.m. until 7:00 a.m. of the next day. From 7:00 a.m. to 11:00 a.m., they were taken to individual pens, in which they were offered the supplement in equal parts once a day, at 8:00 a.m.

The animals were fed a B. decumbens grass base diet and were supplemented at a rate of 1.8 kg animal-1 d-1. The proportion of raw materials of the supplement are shown in table 1. The daily diet allowed animals to meet their requirements and obtain a body weight gain in the order of 0.5 kg animal day-1 (Ruiz and Menchaca 1990Ruíz, R. & Menchaca, M.A. 1990. "Modelado matemático del consumo voluntario en rumiantes. 2. Principios y método para estimar el consumo potencial de materia seca de los pastos y forrajes tropicales". Revista Cubana de Ciencia Agrícola, 24(1): 51-59, ISSN: 2079-3472.).

Treatments. T1 control (conventional supplement), T2 (2 kg of supplement with 20% of inclusion of T. gigantea) and T3 (2 kg of supplement with 20% of inclusion of P. discolor).

Chemical analysis. Samples per species were weighed and subsequently dried in an oven at 60 °C for 48 h and ground in a hammer mill until reaching 1 mm. Later, three samples (200 g sample-1) were taken for laboratory analysis. Preparation, drying and weighing of samples was carried out in the biotechnology, soil and water laboratory of SENA, Putumayo regional.

Proximal chemical analyzes were carried out in the laboratory of AGROSAVIA (Cundinamarca). They were calculated according to procedures and recommendations established by AOAC (2016)AOAC (Association of Official Analytical Chemists). 2016. Official Methods of Analysis of AOAC International. 20th Ed. George W. Latimer Jr (ed). Ed. AOAC International, Rockville MD, USA, ISBN: 978-0935-584-875.: humidity content (method 930.04), crude protein (CP) according to Kjeldahl (N 6.25) (method 955.04), ashes by calcination at 6,000 (method 930.05), ether extract (EE) (method 962.09) and crude fiber (CF) (method 920.39). The metabolizable energy (ME) was determined from the percent of total digestible nutrients (TDN) (Yglesias et al. 2015Yglesias, A.R., Romero de Armas, R., Ponce de Leon, J.L. 2015. Nutrición animal. Ed. Univ. Félix Varela. La Habana, Cuba, ISBN: 978-959-07-1957-8.) and NDF and FDA were determined by the method of Goering and van Soest (1970)Goering, H.K. & Van Soest, P.J. 1970. Forage fiber analyses: Apparatus, reagent, procedures and some applications. In: Agriculture Handbook No. 379. Ed. U.S.D.A. Agricultural Research Service, Department of Agriculture, United States of America, p. 20. (table 2).

Food balance was calculated in both treatments using CALRAC® computer program, version 1.0 of 1996, developed by the Institute of Animal Science (ICA) of the Republic of Cuba. They received an isoenergetic and isoprotein balanced to meet the requirements of heifers according to their weight (Trujillo and Pedroso 1989Trujillo, G.R. & Pedroso, D.M. 1989. Alimentos para rumiantes. Tablas de valor nutritivo. Ed. Instituto de Ciencia Animal, La Habana, Cuba.).

Blood sampling. Samples were collected by a professional in veterinary medicine from the University of Nariño, from the private laboratory, certified by the Instituto Colombiano Agropecuario (ICA). Scientific and administrative techniques for research in animals were considered for sample collection, management and conservation procedures (Jagos et al. 1982Jagos, P., Bouda, J., Kredl, F. & Pedroso, R. 1982. Los valores bioquímicos y hematológicos de los animales domésticos y las nuevas expresiones de los resultados. CIMA, La Habana, Cuba, p.17.). A sample was taken from each animal (four per treatment), at the beginning of supplementation and, later, every 15 d (days 0, 15 and 30) for a total of 36 samples. Sampling was always carried out in the morning, between 6:00 and 7:00 a.m., during fasting. Samples were collected from the coccygeal vein in Vacutainer tubes, without anticoagulant. Once collected, they were taken to the laboratory, where they were centrifuged (3500 rpm) for serum extraction, which was divided into aliquots and frozen (-20°C).

Response variables and equipment. The metabolites of urea nitrogen, creatinine, cholesterol, triglycerides, magnesium, calcium and phosphorus were determined for analysis by blood chemistry tests. A BA88A vet MINDRAY® semi-automated equipment was used, and for the Se and Cu tests, one of the Termo Scientific® brand was used. Atomic absorption method was applied. Biochemical tests were carried out immediately after the collection with blood glucose determination using the automated digital Glucometer system (Bayer®, Germany).

Statistic analysis. For data processing, the theoretical assumptions of analysis of variance were tested. The normality of errors was determined by Shapiro and Wilk (1965)Shapiro, S. & Wilk, B. 1965. "An analysis of variance test for normality (complete samples)". Biometrika, 52(3/4): 591-611, ISSN: 1464-3510, DOI: https://doi.org/10.2307/2333709. test. Pearson correlation analysis and Mauchly (1940)Mauchly, J.W. 1940. "Significance test for sphericity of a normal n-variate distribution". The Annals of Mathematical Statistics, 11(2): 204-209, ISSN: 0003-4851. sphericity test were applied.

For urea, triglycerides, magnesium, selenium, copper and phosphorus, these assumptions were fulfilled, so a linear mixed model was used, with repeated measures over time, with the help of Proc. MIXED. However, for creatinine, cholesterol, calcium and glucose, these assumptions were not fulfilled and a mixed generalized linear model was applied, with Proc. GLIMMIX. Treatments, samples and the interaction treatment per sampling were considered as fixed effects, and the intercept as random effect. The methodology proposed by Gómez et al. (2019)Gómez, S., Torres, V., García, Y., Herrera, M., Medina, Y. & Rodríguez, R. 2019. "Procedimiento estadístico para el análisis de experimentos con medidas repetidas en el tiempo en la esfera agropecuaria". Cuban Journal of Agricultural Science, 53(4): 353-360, ISSN: 2079-3480. was used for data analysis. Toeplitz (Toep) structure was fitted for all variables. For those that did not meet the assumptions, the distribution of best fit to data was Gamma, with a link function (log). To compare means, Tuckey-Kramer (Kramer 1956Kramer, C.Y. 1956. "Extension of multiple range tests to group means with unequal numbers of replications". Biometrics, 12(3): 307-310, ISSN: 0006-341X, DOI: https://doi.org/10.2307/3001469.) fixed range test was used for P <0.05. For data processing, the statistical package SAS (2013)SAS (Statistical Analysis Systems). 2013 The SAS System for Windows, Release 9.3. Statistical Analysis Systems Institute, Cary, North Carolina, U.S.A., version 9.3, was used.

The analysis of blood metabolites showed interaction (P = 0.0009) among treatments and sampling days (table 3). In the case of cholesterol, values were within the normal range for this species (2.07 to 3.11 mmol L-1) (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.). Results indicated that, at 30 d of supplementation, values of control and 20% of T. gigantea treatments increased by 1.23 and 1.20 times, respectively, when taking the begining as a reference. Meanwhile, the treatment with 20% of P. discolor did not differ between periods. This treatment decreased its concentration by 19.01% with respect to control, at 30 d of supplementation.

Results are comparable with the reports of the evaluation of the development of cattle for meat production, in which cholesterol levels of 1.55 - 2.85 mmol L-1 are indicated (Cordeiro et al. 2015Cordeiro, M.B., Peres, M.S., de Souza, J.M., Gaspar, P., Barbiere, F., Sá Filho, M.F. & Membrive, C.M.B. 2015. "Supplementation with sunflower seed increases circulating cholesterol concentrations and potentially impacts on the pregnancy rates in Bos indicus beef cattle". Theriogenology, 83(9): 1461-1468, ISSN: 0093-691X, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2015.01.022.) in animals with a mean weight of 405.1 kg, supplemented with glycerol.

Wehrman et al. (1991)Wehrman, M.E., Welsh, T.H. Jr. & Williams, L.G. 1991. "Diet-induced hyperlipidemia in cattle modifies the intrafollicular cholesterol environment, modulates ovarian follicular dynamics, and hastens the onset of postpartum luteal activity". Biology of Reproduction, 45(3): 514-522, ISSN: 0006-3366, DOI: https://doi.org/10.1095/biolreprod45.3.514. found that progesterone synthesis (P4) improves in female cattle after supplementing them with fat for 30 d, which is associated with an increase of blood cholesterol concentration. In this regard, results of the present study could be related to the process of supplementation with forage resources, which can keep cholesterol concentrations stable.

For Hawkins et al. (1995)Hawkins, D.E., Niswender, K.D., Oss, G.M., Moeller, C.L., Odde, K.G., Sawyer, H.R. & Niswender, G.D. 1995. "An increase in serum lipids increases luteal lipid content and alters the disappearance rate of progesterone in cows". Journal of Animal Science, 73(2): 541-545, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.2527/1995.732541x., cholesterol is a metabolite that is directly related to ovarian function (mandatory precursor of progesterone). Therefore, greater or lesser changes in its concentrations in blood or follicular fluid, could regulate the biosynthesis of this hormone. Similarly, intake decrease influence on the low glucose production and affects cholesterol synthesis and the production of estrogens, since there will be no energy surpluses that can synthesize the precursor of the steroidal hormone (Campos and Hernández 2008Campos, G.R & Hernández, E.A. 2008. Relación nutrición fertilidad en bovinos. Un Enfoque Bioquímico y Fisiológico. Repositorio Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, Colombia, pp. 1-57.).

Hernández et al. (2019)Hernández, E.A., Gaona, R.C. & Patiño, G. 2019. "Metabolic behaviour in the peripartum period of dairy cows Hartón del Valle creole breed, under tropical conditions". Acta Agronómica, 60(2011): 1-9, ISSN: 0120-2812. reported that higher values ​​can affect homeostasis of the animal, which is explained by an increase of energy. Fatty acids are transformed into acetyl-CoA, and the liver turns them into ketone bodies that some peripheral tissues (brain) use as an energy source. According to Suksombat et al. (2017)Suksombat, W., Nanon, A., Meeprom, C. & Lounglawan, P. 2017. "Feed degradability, rumen fermentation and blood metabolites in response to essential oil addition to fi stulated non-lactating dairy cow diets". Animal Science Journal, 88(9): 1346-1351, ISSN: 1740-0929, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/asj.12778., excessive amounts of ketone bodies produce toxicity, and can undergo condensation in the liver and become β-hydroxy-β-methyl-glutaryl-CoA, which serves as a source of mevalonate (precursor of cholesterol formed in excess). This explains the results of this research, probably due to the energy imbalance that occurs at the beginning of supplementation.

Results for the rest of metabolites (urea, creatinine, glucose, triglycerides, calcium, phosphorus, copper, selenium and magnesium) showed no interaction. When analyzing the three used supplements, no differences were observed in their concentration (table 4). This is positive, as there are no marked effects on metabolites from the supply of the supplements.

Blood urea values ranged between 5.25 and 5.76 mmol L-1, comparable with those reported by Xuan et al. (2018)Xuan, N.H., Loc, H.T. & Ngu, N.T. 2018. "Blood biochemical profiles of Brahman crossbred cattle supplemented with different protein and energy sources". Veterinary World, 11(1): 1021-1024, ISSN: 2231-0916, DOI: https://dx.doi.org/10.14202/vetworld.2018.1021-1024., who evaluated different protein contents in the diet and referred 4.46 mmol L-1 in Bos indicus cattle, with a body weight of 178 ± 12.5 kg.

Wang et al. (2018)Wang, C.A., Liu, Q.A., Guo, G.A., Huo, W.J.A., Zhang, Y.L.A., Pei, C.X.A. & Wang, H.C. 2018. "Effects of substituting corn with steam- flaked sorghum on growth, digestion and blood metabolites in young cattle fed feedlot diets". Animal Production Science, 58(2): 299-306, ISSN: 1836-5787, DOI: https://dx.doi.org/http://dx.doi.org/10.1071/AN16265., in B. taurus cattle, with a conventional diet and weight of 356.4±2.6kg, tested a diet with corn silage that provided 10.66 MJ kg-1 and 12.2% of CP. These authors obtained 4.35 mmol L-1 of urea, inferior value to that achieved in this study, when supplementing with 20% of P. discolor.

The creatinine content was among the reference values indicated by Campos et al. (2012)Campos, G.R., García-Alegría, K., Hernández, E.A. & Giraldo-Patiño, L. 2012. "Protein and mineral metabolites for dairy cows during the transition period under tropical conditions". Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 65(2): 6719-6728, ISSN: 2248-7026. for the species (70.80 to 176.99 mmol L-1). There was a decrease of 27.17% at 15 and 30 d with respect to the beginning (P <0.0001).

Creatinine is an indicator of kidney function and muscle catabolism (Zanferari et al. 2015Zanferari, F., del Valle, T.A., Vendramini, T.H.A., Silva, T.H.D., Rentas, M.F., Gardinal, R. & Rennó, F.P. 2015. Avaliação do uso da creatinina como indicador para estimativas da excreção urinária em vacas leiteiras. Novos desafios da pesquisa em nutrição e produção animal. Ed. 5D. Pirassununga, Sao Paulo, Brasil, ISBN: 978-85-60014-36-1.). The found values were similar to those reported by Kim et al. (2018)Kim, D.H., Choi, S.H., Park, S.K., Lee, S.S. & Choi, C.W. 2018. "Effect of corn grain particle size on ruminal fermentation and blood metabolites of Holstein steers fed total mixed ration". Asian Australasian Journal of Animal Sciences, 31(1): 80-85, ISSN: 1976-5517, DOI: https://dx.doi.org/10.5713/ajas.17.0069., who reported 82.30 mmol L-1 in B. taurus cattle that consumed a diet with 17.2% of CP. Likewise, they were similar to the 97.35 mmol L-1 registered in Holstein cows with 256kg of body weight, which consumed a whole diet of corn silage and ryegrass with 13.4% of CP.

Regarding glucose, values ​​were between 3.79 and 3.74 mmol L-1. This interval is in the range of 2.5-4.16 mmol L-1 indicated by Campos et al. (2004)Campos, R., Carreño, E.S. & Gonzales, F.D. 2004. "Perfil metabólico de vacas nativas colombianas". Revista Orinoquia, 8(2): 32-41, ISSN: 0121-3709. for B. taurus breed. Figures of triglycerides are also in the reference range (from 0 to 1.6 mmol L-1), according to Roa et al. (2017)Roa,V.M.L., Ladino, R.E. & Hernández, M.M. 2017. "Indicadores de bioquímica sanguínea en bovinos suplementados con Cratylia argentea y Saccharomyces cerevisiae". Pastos y Forrajes, 40(2): 144-151, ISSN: 2078-8452..

Mean values of studied minerals were within the normal ranges for the species: 2.42 to 3.09 mmol L-1 for Ca (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.), 1.83 ± 0.50 mmol L-1 for P (Cedeño et al. 2011Cedeño-Quevedo, D.A., Ceballos-Marquez, A., Garzón, C. & Daza-Bolaños, C.A. 2011. "A comparative study of metabolic mineral profiles on dairy farms from two regions in Nariño department". Orinoquia, 15(2): 160-168, ISSN: 0121-3709.) and 9.45> µg dL-1 for Cu (Rosa 2015Rosa, D.E. 2015. Efecto del cobre durante la maduración de ovocitos bovinos: impacto sobre el desarrollo embrionario preimplantacional. PhD Thesis. Universidad de la Plata, Buenos Aires, Argentina.).

When analyzing the sampling periods (0, 15 and 30 d), differences were registered in the concentration of metabolites urea, creatinine, glucose, triglycerides, calcium, copper, selenium and magnesium (table 5).

Regarding the results obtained in the metabolites that were influenced by sampling time, it could be appreciated that, at 30 d, urea concentration decreased (P <0.0001) by 39.5% on average, with respect to 0 and 15 d (table 5). The value of urea is within the reference figures (3.83 - 9.66 mmol L-1) cited by Guerra et al. (2018)Guerra, M.G., Veras, A.S., Santos, V.L., Ferreira, M.A., Novaes, L.P., Barreto, L.M. & Silva, L.R. 2018. "Perfil metabólico proteico de vacas em lactação alimentadas com milho e ureia a pasto".Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 70(4): 1266-1274, ISSN: 1678-4162, DOI: http://dx.doi.org/10.1590/1678-4162-9677..

Urea level at the beginning was high in all treatments. However, it began to decrease (P<0.0001) from day 15 in 32.2% with respect to the beginning, and the lowest value was shown at 30 d, with 25.2 and 49.2% less compared to the 15 d after the beginning, respectively. It is possible that there was no adequate protein/energy relation in the base diet, since animals were grazing with B. decumbens, which reported a low energy value (6.36 MJ kg DM-1). This causes ammonia levels to increase in the rumen due to low energy availability and, therefore, blood urea levels increase (Portilla et al. 2019Portilla, D., Barragán, W., Carvajal, C. & Cajas, Y. 2019. "Estimación de la calidad de la dieta en sistemas silvopastoriles mediante la cuantificación del nitrógeno fecal". Revista Colombiana de Ciencia Animal, 11(1), ISSN: 2027-4297, DOI: https://doi.org/10.24188/recia.v0.n0.2019.691.). Likewise, diets with low levels of non-protein nitrogen and degradable protein in the rumen show reduced digestibility, which decreases the flow of microbial protein (Carrillo et al. 2018Carrillo, C., Lizandro, G., Cerquera, M., Augusto, C. & Bibiana, O.K. 2018. "Evaluación del parámetro nitrógeno ureico en leche obtenido en un período de siete meses en la Hacienda la Montaña, Antioquia, Colombia". Revista Electrónica de Veterinaria, 19(3): 1-10, ISSN: 1695-7504.).

According to Sun et al. (2018)Sun, J., Xu, J., Shen, Y., Wang, M., Yu, L. & Wang, H. 2018. "Effects of different dietary ratio of physically effective neutral detergent fiber and metabolizable glucose on rumen fermentation, blood metabolites and growth performance of 8 to 10-month-old heifers". Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 31(8): 1230-1237, ISSN: 1011-2367, DOI: https://dx.doi.org/https://doi.org/10.5713/ajas.17.0885., the asynchronism in the fermentation of nitrogen and energy sources results in increased absorption of ruminal ammonia in the bloodstream and its conversion to urea in the liver. This probably caused a high biological value at the beginning of this experiment. Hepatic saturation of excess ruminal ammonia requires a caloric expenditure for ruminants of 0.2 Mcal NL/100 g (Blanchard 1990Blanchard, T., Ferguson, J., Love, L., Takeda, T., Henderson, B., Hasler, J. & Chalupa, W. 1990. "Effect of dietary crude-protein type on fertilization and embryo quality in dairy cattle". American Journal of Veterinary Research, 51(6): 905-908, ISSN: 2639-7315.).

When comparing the periods evaluated for glucose (table 5), differences were found with an increase (P=0.0025) in 1.22 times, on day 30 of starting the supplementation, in relation to the 15 days of initiation, which did not differ from each other. On day 30, it was 3.54, superior to the 3.28 mmol L-1 reported by Akbarian-Tefaghi et al. (2018)Akbarian-tefaghi, M., Ghasemi, E. & Khorvash, M. 2018. "Performance, rumen fermentation and blood metabolites of dairy calves fed starter mixtures supplemented with herbal plants, essential oils or monensin". Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 102: 630-638, ISSN: 1439-0396, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/jpn.12842. in cattle with 229.9 kg of body weight, fed with native forages, with 12.0% of CP and 72.0% of TDN, which is lower than the 4.75 mmol L-1 indicated by Amirifard et al. (2016)Amirifard, R., Khorvash, M., Forouzmand, M., Rahmani, H.R., Riasi, A., Malekkhahi, M. & Hosseini-Ghaffari, M. 2016. "Performance and plasma concentration of metabolites in transition dairy cows supplemented with vitamin E and fat". Journal of Integrative Agriculture, 15(5): 1076-1084, ISSN: 2095-3119, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/S2095-3119(15)61090-5.. These authors studied essential oil supplements in a diet containing 19.6% of urea and 23 g kg-1 of thyme essential oil. Likewise, they are similar to the 3.73 mmol L-1 obtained in prepartum cows, supplemented in the transition period with a diet with 14.6% of CP and 1.55 ENL (Mcal kg-1) (Kekana et al. 2018Kekana, T.W., Nherera-Chokuda, F.V., Muya, M.C. & Manyama, K.M. 2018. "Milk production and blood metabolites of dairy cattle as influenced by thermal-humidity index". Tropical Animal Health and Production, 50(4): 921-924, ISSN: 1573-7438, DOI: https://dx.doi.org/10.1007/s11250-018-1513.).

The results found for glucose in this study, favored by the treatment with P. discolo, indicate that it is essential for production and release of GnRH at hypothalamic level. It has been demonstrated that with the inhibition of glycolysis at neuronal level, the frequency of LH pulses is lower, due to the inhibition of GnRH synthesis and levels of IGF-1 (Meléndez and Bartolomé 2017Meléndez, P. & Bartolomé, J. 2017. "Avances sobre nutrición y fertilidad en ganado lechero: Revisión". Revista Mexicana de Ciencias Pecuarias, 8(4): 407-417, ISSN: 2448-6698, DOI: http://dx.doi.org/10.22319/rmcp.v8i4.4160.).

The value of triglycerides decreased (P=0.0001) in 19.14% on average, at 15 and 30 d, compared to the beginning. This could be corroborated in the treatment with T. gigantea on day 30. The found results are similar to those reported by Nemati et al. (2015), with triglyceride values of 0.21 to 0.30 mmol L-1, when measuring the effect of the diet with 19.2% of CP, 2.82 of ME (Mcal kg-1) and 12.5% of alfalfa (Medicago sativa). They are also similar to those of Roa et al. (2017)Roa,V.M.L., Ladino, R.E. & Hernández, M.M. 2017. "Indicadores de bioquímica sanguínea en bovinos suplementados con Cratylia argentea y Saccharomyces cerevisiae". Pastos y Forrajes, 40(2): 144-151, ISSN: 2078-8452., who indicated 0.68 mmol L-1 in bovines supplemented with 3.5 kg of Cratylia argentea, and the 0.52 mmol L-1 reported by Galvis et al. (2017)Galvis, R.D., Madrid, L.V. & Ramírez-Vásquez, N. 2017. "L-carnitine supplementation descreases hepatic triglyceride 8 accumulation in Holstein cows during the transition period". Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, 32(3): 166-174, ISSN: 0120-0690, DOI: http://dx.doi.org/10.17533/udea.rccp.v32n3a01. in a supplementation with 16.8% of CP and EE of 5.72% for cows before parturition.

In this experiment, the values were higher at the beginning of supplementation. It is possible that the increase of nutrients as energy sources caused the mobilization of triglycerides, due to fat storage in the animal, with a decrease of values (Ntallaris et al. 2017Ntallaris, T., Humblot, P., Båge, R., Sjunnesson, Y., Dupont, J. & Berglund, B. 2017. "Effect of energy balance profiles on metabolic and reproductive response in Holstein and Swedish Red cows". Theriogenology, 90: 276-283, ISSN: 0093-691X, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2016.12.012.).

The values found for the microminerals copper and selenium and magnesium were influenced by the contribution of forage, according to their chemical composition, and by the addition of 1% of vitamin and mineral premix in the supplement, which could explain the obtained results.

In the case of minerals like phosphorus, no variation was demonstrated with the supplementation time. Calcium decreased 25.7% (P <0.0001) on average, in days 15 and 30, which did not differ from each other compared to the beginning. Copper did so by 17%, on days 15 and 30, which did differ. Normocalcemia is related to the adequate entry of the cation and proper functioning of the homeostatic mechanism. In a study carried out with supplementation of 9.7% of CP and 58.2% of TDN, Ca values of 2.61 mmol L-1 were announced (Asano et al. 2017Asano, K., Ishida, M. & Ishida, M. 2017. "Effects of inclusion levels of pelleted silvergrass (Miscanthus sinensis Andress) in the diet on digestibility, chewing activity, ruminal fermentation and blood metabolites in breeding Japanese Black cows". Animal Science Journal, 88(April 2016): 468-475, ISSN: 1740-0929, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/asj.12665.).

Results for copper were below those reported by Campos et al. (2012)Campos, G.R., García-Alegría, K., Hernández, E.A. & Giraldo-Patiño, L. 2012. "Protein and mineral metabolites for dairy cows during the transition period under tropical conditions". Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 65(2): 6719-6728, ISSN: 2248-7026. in crossbred Taurus heifers, with values of 9.38 mmol L-1. Therefore, on days 0 and 15, the values were in the range of normocupremia, which is superior to 9.45 mmol L-1 (Fazzio 2010Fazzio, L.E. 2010. Caracterización de terneros de cría con hipocuprosis. PhD Thesis. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Buenos Aires, Argentina.). It is important to state that, although no differences were found among treatments, this may indicate that there was a slight copper deficiency.

The previous elements could explain copper insufficiency because the effect of protein in diets accelerates the action of ruminal microorganisms, which originates the formation of sulfates. They are bonded to the iron of soils, which is abundant in this area of the Amazonian piedmont, and forms the iron sulfure, which, according to reports of Arthington and Brown (2005)Arthington, J.D. & Brown, W.F. 2005. "Estimation of feeding value of four tropical forage species at two stages of maturity". Journal of Animal Science, 83(7): 1726-1731, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.2527/2005.8371726x., decreases absorption of copper at ruminal level.

This element has been indicated to be related to synthesis and secretion of gonadotropins, by modulating the ability to release luteinizing hormone (Garrik et al. 2003Garrik, M.D., Nuñez, M.T., Olivares, M. & Harris, E.D. 2003. "Parallels and contrasts between iron and copper metabolism". BioMetals, 16(1): 1-8, ISSN: 1572-8773, DOI: https://doi.org/10.1023/A:1020735401734. and Michaluk and Kochman 2007Michaluk, A. & Kochman, K. 2007. "Involvement of copper in female reproduction". Reproductive Biology, 7(3): 193-205, ISSN: 1642-431X.). In this way, nutrition strategies with oligoelements for growing heifers can ultimately determine yield during their productive and reproductive performance (Yatoo et al. 2013Yatoo, M.I., Saxena, A., Deepa, P.M., Habeab, B.P., Devi, S., Jatav, R.S. & Dimri, U. 2013. "Role of trace elements in animals: a review". Veterinary World, 6(12): 963-967, ISSN: 2231-0916.). This last aspect must be taken into account to include this mineral in supplementation programs and incorporate tree systems to improve soil conditions of the Amazon (Ramírez-Iglesias et al. 2020Ramírez-Iglesias, E., Cuenca, K. & Quizhpe, W. 2020. "Manejo integrado de agroecosistemas en América Latina: Una opción para maximizar la producción resguardando la biodiversidad". Tekhné, 23(1): 1-11, ISSN: 1316-3930.), which justifies the low levels found in this study.

Selenium values increased, on average, by 18.75%, at 15 and 30 d compared to the begining. In all cases, they were in the range of reference values reported by Ceballos et al. (1999)Ceballos A.F., Wittwer, P., Contreras, E., Quiroz, H. & Böhmwald, H.L. 1999. "Actividad de glutation peroxidasa en bovinos lecheros a pastoreo correlacionada con la concentración sanguínea y plasmática de selenio". Pesquisa Agropecuária Brasileira, 34(12): 2331-2338, ISSN: 1678-3921, DOI: https://doi.org/10.1590/S0100-204X1999001200020., between 0.06 and 1.24 µmol L-1. Regarding magnesium, a decrease of 37.97% was shown on day 15, in relation to the values of the beginning and day 30, which did not differ from each other, and are included in the reference values, from 0.74 to 0.95 mmol L-1 (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.).

These results could be compared with those reported by Kang et al. (2017)Kang, H.J., Lee, I.K., Piao, M.Y., Gu, M.J., Yun, C.H., Kim, H.J., Baik, M. 2016. "Effects of Ambient Temperature on Growth Performance, Blood Metabolites, and Immune Cell Populations in Korean Cattle Steers". Asian Australasian Journal of Animal Science, 29(3): 436-443, ISSN: 1976-5517, DOI: http://dx.doi.org/10.5713/ajas.15.0937., who declared values from 0.82 to 1.03 mmol L-1 of Mg, when supplementing for 90 days before service, which causes higher pregnancy rates, according to Irabuena et al. (2016)Irabuena, O., Sterla, S., Fernández Abella, D., Betancur, S., Capdevielle, L. & Ferreira, A. 2016. Efecto de la suplementación con selenio sobre el desempeño reproductivo de vacas de segunda cría. 39º Congreso Argentino de Producción Animal, Facultad de Veterinaria UDELAR, Universidad de la República, Salto, Uruguay.. Indeed, the values found for this mineral may lead to a decrease of fertility in female bovines due to the effect of embryonic mortality in the first third of gestation (Abbott et al. 2019Abbott, C.R., Payton, R.R., Edwards, J.L., Russell, J.R., Smith, J.K. & Pohler, K.G. 2019. "Effect of complexed trace minerals on cumulus-oocyte complex recovery and in vitro embryo production in beef cattle". Journal of Animal Science, 97(4): 1478-1490, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.1093/jas/skz005.).

The substitution of 20% of the conventional supplement for P. discolor or T. gigantea did not affect the studied blood indicators. However, the increase of supplementation over time improved blood indicators of triglycerides, urea, creatinine and selenium. Thus, supplementation with 20% of inclusion of P. discolor mantained stable cholesterol levels and improved glucose levels in the 30 d of supplementation. It is a viable option to keep a nutritional status in Harton del Valle heifers, under grazing conditions in the Amazon piedemont.

Localización y área de estudio. El trabajo se llevó a cabo en la finca Villa Lucero, a 0°35'25.6"N 76°32'05.3"W del departamento del Putumayo, al suroccidente de la República de Colombia. Esta región se halla a una altitud de 256 m s.n.m. Tiene una temperatura promedio 25.3ºC, con 85 % de humedad relativa y precipitación anual de 3355 mm (IDEAM 2017Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales-IDEAM. 2017. Subdirección de Meteorología. Available: http://www.ideam.gov.co/web/atencion-y-participacion-ciudadana/publicaciones-ideam.), características que corresponden a la zona de vida bosque húmedo tropical (Holdridge 1982Holdridge, L.R. 1982. "Determination of world plant formations from simple climatic data". Science, 105(2727): 367-368, ISSN: 1095-9203, DOI: https://doi.org/10.1126/science.105.2727.367.). Sus suelos son arcillo-limoso y arcilloso respectivamente, ácidos (pH 4.6), bajos en fósforo (< 1.7 mg kg -1) y con altos contenidos de aluminio (> 3.2 cmol kg -1) y hierro (Landínez-Torres 2017Landínez-Torres, Y.Á. 2017. "Uso y manejo del suelo en la amazonía colombiana". Revista CES Medicina Veterinaria y Zootecnia, 12(2): 151-163, ISSN: 1900-9607, DOI: http://dx.doi.org/10.21615/cesmvz.12.2.6.). Durante el período de muestreo, en la etapa experimental, no se regó el terreno ni se fertilizaron las plantas.

Como forrajeras se utilizaron las especies Trichantera gigantea (Acanthaceae) y Piptocoma discolor (Asteraceae), esta última nativa de la amazonía. Se cosecharon de un banco forrajero establecido en la finca con plantas de un año de edad, a las que se les realizó un manejo agronómico de poda, control de insectos y arvenses. Se hizo un corte de establecimiento y se usó el rebrote de las plantas a los 60 d. De cada parcela se tomaron en zig-zag 15 plantas como muestra. Se recolectaron, y de cada una se utilizaron las hojas y tallos tiernos a partir de 20 cm del suelo en la época de verano, en junio (Fick et al. 1976Fick, R., Miller, S. & Funk, D. 1976. Métodos de análisis de minerales para tejidos de plantas y animales. Animal Science Department, Center for Tropical Agriculture, University of Florida, Gainesville, Florida, U.S.A., p. 39.). Las muestras de material fresco se secaron en estufa a 60 °C durante 48 h y se trituraron hasta alcanzar 1 mm en un molino de martillo. Posteriormente, se tomaron tres muestras de 200 g para los análisis. El alistamiento, secado y pesado se realizó en el laboratorio de biotecnología, suelos y agua del SENA, regional Putumayo.

Animales. Se seleccionaron de acuerdo con su valoración genotípica 12 bovinos puros Hartón del Valle, con peso promedio de 340 ± 20 kg peso vivo. Los pesos corporales se consignaron según los estimados a partir de la medición del perímetro torácico con una cinta métrica, según la metodología propuesta por Álvarez (1997)Álvarez, J.L. 1997. "La condición corporal en la hembra bovina". Revista de Salud Animal, 19(1): 37-45, ISSN: 0253-570X.. Para el manejo sanitario se desparasitaron cada tres meses y se realizó un plan de vacunación anual para el control de enfermedades reproductivas (IBR, DVB, brucelosis), y otras de registro obligatorio en Colombia (fiebre aftosa y rabia silvestre).

Alimentación. Para la dieta base de forraje se utilizarón 6.0 ha en una pradera de pasto Brachiaria decumbens, dividida en 14 potreros de 4.285 m2. Se dividió la pradera con cinta eléctrica según el consumo promedio de 15 % de su peso vivo, de acuerdo con los datos del aforo, con una producción de 0.450 kg/m2. Cada potrero se cortó de manera uniforme, de acuerdo con el período de ocupación de cuatro días, a fin de que el forraje ofrecido tuviera la misma edad de rebrote de 56 d de descanso, propio para esta zona. Se sometieron a un período de adaptación de 15 d. Durante el estudio, los animales permanecierón en los potreros asignados desde las 11:00 a.m. hasta las 7:00 a.m. del día siguiente. A partir de las 7:00 a.m. hasta las 11:00 a.m. se llevaron a corrales individuales, donde se les ofreció el suplemento en partes iguales una vez al día, a las 8:00 a.m.

Los animales se alimentaron con una dieta base de pasto B. decumbens y se suplementaron a razón de 1.8 kg animal-1 d-1. La proporción de las materias primas del suplemento se exponen en la tabla 1. La dieta suministrada diariamente posibilitó que los animales cubrieran sus requerimientos y obtuvieran una ganancia de peso corporal en el orden de los 0.5 kg animal día-1 (Ruiz y Menchaca 1990Ruíz, R. & Menchaca, M.A. 1990. "Modelado matemático del consumo voluntario en rumiantes. 2. Principios y método para estimar el consumo potencial de materia seca de los pastos y forrajes tropicales". Revista Cubana de Ciencia Agrícola, 24(1): 51-59, ISSN: 2079-3472.).

Tratamientos. T1 control (suplemento convencional), T2 (2 kg suplemento con 20 % de inclusión de T. gigantea) y T3 (2 kg suplemento con 20 % de inclusión de P. discolor).

Análisis químicos. Las muestras por especie se pesaron y posteriormente se secaron en estufa a 60 °C durante 48 h y se trituraron en un molino de martillo hasta alcanzar 1 mm. Posteriormente, se tomaron tres muestras (200 g muestra-1) para los análisis de laboratorio. El alistamiento, secado y pesaje de las muestras se realizó en el laboratorio de biotecnología, suelos y agua del SENA, regional Putumayo.

Los análisis químicos proximales de realizaron en el laboratorio de AGROSAVIA (Cundinamarca). Se calcularon de acuerdo con los procedimientos y recomendaciones establecidas por la AOAC (2016)AOAC (Association of Official Analytical Chemists). 2016. Official Methods of Analysis of AOAC International. 20th Ed. George W. Latimer Jr (ed). Ed. AOAC International, Rockville MD, USA, ISBN: 978-0935-584-875.: contenido de humedad (método 930.04), proteína bruta (PB) según Kjeldahl (N 6.25) (método 955.04), cenizas por calcinación a 6000 (método 930.05), extracto etéreo (EE) (método 962.09) y fibra bruta (FB) (método 920.39). La energía metabolizable (EM) se determinó a partir del por ciento de nutrientes digestibles totales (NDT) (Yglesias et al. 2015Yglesias, A.R., Romero de Armas, R., Ponce de Leon, J.L. 2015. Nutrición animal. Ed. Univ. Félix Varela. La Habana, Cuba, ISBN: 978-959-07-1957-8.) y la FDN y FDA por el método de Goering y van Soest (1970)Goering, H.K. & Van Soest, P.J. 1970. Forage fiber analyses: Apparatus, reagent, procedures and some applications. In: Agriculture Handbook No. 379. Ed. U.S.D.A. Agricultural Research Service, Department of Agriculture, United States of America, p. 20. (tabla 2).

El balance alimentario se calculó en ambos tratamientos mediante el programa de computación CALRAC®, versión 1.0 de 1996, desarrollado por el Instituto de Ciencia Animal (ICA) de la República de Cuba. Se balancearon isoenergéticamente e isoproteicamente para cumplir con los requerimientos de las novillas de acuerdo con su peso (Trujillo y Pedroso 1989Trujillo, G.R. & Pedroso, D.M. 1989. Alimentos para rumiantes. Tablas de valor nutritivo. Ed. Instituto de Ciencia Animal, La Habana, Cuba.).

Muestreo de sangre. Las muestras se recolectaron por un profesional en medicina veterinaria de la Universidad de Nariño, del laboratorio privado, con certificación del Instituto Colombiano Agropecuario (ICA). Para los procedimientos de recolección de muestras, manejo y conservación se tuvieron en cuenta técnicas científicas y administrativas para la investigación en animales (Jagos et al. 1982Jagos, P., Bouda, J., Kredl, F. & Pedroso, R. 1982. Los valores bioquímicos y hematológicos de los animales domésticos y las nuevas expresiones de los resultados. CIMA, La Habana, Cuba, p.17.). Se tomó una muestra por cada animal (cuatro por tratamiento), al inicio de la suplementación y después cada 15 d (días 0, 15 y 30) para un total de 36 muestras. El muestreo se llevó a cabo siempre en el horario de la mañana, entre las 6:00 y 7:00 a.m., en ayunas. Las muestras se colectaron de la vena coccígea en tubos Vacutainer, sin anticoagulante. Una vez recogidas, se llevaron al laboratorio, donde se centrifugaron (3500 r.p.m.) para la extracción de suero, que se dividió en alícuotas y se congeló (-20 °C).

Variables de respuesta y equipos. Se determinaron los metabolitos nitrógeno ureico, creatinina, colesterol, triglicéridos, magnesio, calcio y fósforo para su análisis mediante pruebas de química sanguínea. Se utilizó un equipo semiautomatizado BA88A vet MINDRAY®, y para las pruebas de Se y Cu se usó uno de la marca Termo Scientific®. Se aplicó el método de absorción atómica. Las pruebas bioquímicas se realizaron inmediatamente después de la colecta con la determinación de glucosa en sangre mediante el sistema digital automatizado Glucometer (Bayer®, Alemania).

Análisis estadístico. Para el procesamiento de los datos se probaron los supuestos teóricos del análisis de varianza. La normalidad de los errores se determinó por la dócima de Shapiro y Wilk (1965)Shapiro, S. & Wilk, B. 1965. "An analysis of variance test for normality (complete samples)". Biometrika, 52(3/4): 591-611, ISSN: 1464-3510, DOI: https://doi.org/10.2307/2333709.. Se aplicó el análisis de correlación de Pearson y la prueba de esfericidad de Mauchly (1940)Mauchly, J.W. 1940. "Significance test for sphericity of a normal n-variate distribution". The Annals of Mathematical Statistics, 11(2): 204-209, ISSN: 0003-4851..

Para las variables urea, triglicéridos, magnesio, selenio, cobre y fósforo se cumplieron dichos supuestos, por lo que se utilizó un modelo lineal mixto, con medidas repetidas en el tiempo, con ayuda del Proc. MIXED. Sin embargo, para las variables creatinina, colesterol, calcio y glucosa, se incumplieron dichos supuestos y se aplicó un modelo lineal generalizado mixto, con el Proc. GLIMMIX. Se consideraron como efectos fijos los tratamientos, muestreos y la interacción tratamiento por muestreo, y como efecto aleatorio el intercepto. Se utilizó la metodología propuesta por Gómez et al. (2019)Gómez, S., Torres, V., García, Y., Herrera, M., Medina, Y. & Rodríguez, R. 2019. "Procedimiento estadístico para el análisis de experimentos con medidas repetidas en el tiempo en la esfera agropecuaria". Cuban Journal of Agricultural Science, 53(4): 353-360, ISSN: 2079-3480. para el análisis de los datos. Para todas las variables se ajustó la estructura Toeplitz (Toep). Para las que no cumplieron los supuestos, la distribución de mejor ajuste a los datos fue la Gamma, con función de enlace (log). Para comparar las medias, se utilizó la dócima de rango fijo Tuckey-Kramer (Kramer 1956Kramer, C.Y. 1956. "Extension of multiple range tests to group means with unequal numbers of replications". Biometrics, 12(3): 307-310, ISSN: 0006-341X, DOI: https://doi.org/10.2307/3001469.) para P < 0.05. En el procesamiento de los datos se usó el paquete estadístico SAS (2013)SAS (Statistical Analysis Systems). 2013 The SAS System for Windows, Release 9.3. Statistical Analysis Systems Institute, Cary, North Carolina, U.S.A., versión 9.3.

El análisis de los metabolitos sanguíneos reflejó interacción (P=0.0009) entre tratamientos y días de muestreo (tabla 3). En el caso del colesterol, los valores estuvieron en el rango normal para la especie (2.07 a 3.11 mmol L-1) (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.). Los resultados indicaron que a los 30 d de suplementación, los valores de los tratamientos control y 20 % de T. gigantea se incrementaron en 1.23 y 1.20 veces, respectivamente, al tomar como referencia el inicio. Mientras, el tratamiento con 20 % de P. discolor no difirió entre períodos. Este tratamiento disminuyó en 19.01 % su concentración con respecto al control, a los 30 d de suplementación.

Los resultados son comparables con los informes de la evaluación del desarrollo de vacunos en producción de carne, donde se señalan niveles de 1,55 - 2,85 mmol L-1 de colesterol (Cordeiro et al. 2015Cordeiro, M.B., Peres, M.S., de Souza, J.M., Gaspar, P., Barbiere, F., Sá Filho, M.F. & Membrive, C.M.B. 2015. "Supplementation with sunflower seed increases circulating cholesterol concentrations and potentially impacts on the pregnancy rates in Bos indicus beef cattle". Theriogenology, 83(9): 1461-1468, ISSN: 0093-691X, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2015.01.022.) en animales con peso promedio de 405.1 kg, suplementados con glicerol.

Wehrman et al. (1991)Wehrman, M.E., Welsh, T.H. Jr. & Williams, L.G. 1991. "Diet-induced hyperlipidemia in cattle modifies the intrafollicular cholesterol environment, modulates ovarian follicular dynamics, and hastens the onset of postpartum luteal activity". Biology of Reproduction, 45(3): 514-522, ISSN: 0006-3366, DOI: https://doi.org/10.1095/biolreprod45.3.514. encontraron que la síntesis de progesterona (P4) mejora en hembras vacunas después de suplementarlas con grasa durante 30 d, lo que se asocia a un incremento de la concentración de colesterol en sangre. Al respecto, los resultados del presente estudio podrían estar relacionados con el proceso de suplementación con recursos forrajeros, lo que puede mantener estables las concentraciones de colesterol.

Para Hawkins et al. (1995)Hawkins, D.E., Niswender, K.D., Oss, G.M., Moeller, C.L., Odde, K.G., Sawyer, H.R. & Niswender, G.D. 1995. "An increase in serum lipids increases luteal lipid content and alters the disappearance rate of progesterone in cows". Journal of Animal Science, 73(2): 541-545, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.2527/1995.732541x., el colesterol es un metabolito que se relaciona directamente con la función ovárica (precursor obligatorio de la progesterona). Por tanto, los cambios en sus concentraciones en sangre o fluido folicular, mayores o menores, podrían regular la biosíntesis de esta hormona. De igual manera, la disminución del consumo incide en la baja producción de glucosa y afecta la síntesis de colesterol y la producción de estrógenos, ya que no habrá excedentes energéticos que puedan sintetizar el precursor de la hormona esteroidal (Campos y Hernández 2008Campos, G.R & Hernández, E.A. 2008. Relación nutrición fertilidad en bovinos. Un Enfoque Bioquímico y Fisiológico. Repositorio Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá, Colombia, pp. 1-57.).

Hernández et al. (2019)Hernández, E.A., Gaona, R.C. & Patiño, G. 2019. "Metabolic behaviour in the peripartum period of dairy cows Hartón del Valle creole breed, under tropical conditions". Acta Agronómica, 60(2011): 1-9, ISSN: 0120-2812. refieren que valores superiores pueden afectar la homeostasis del animal, lo que se explica por un incremento en la energía. Los ácidos grasos se convierten a acetil-CoA, y el hígado los transforma en cuerpos cetónicos que algunos tejidos periféricos (cerebro) utilizan como fuente de energía. De acuerdo con Suksombat et al. (2017)Suksombat, W., Nanon, A., Meeprom, C. & Lounglawan, P. 2017. "Feed degradability, rumen fermentation and blood metabolites in response to essential oil addition to fi stulated non-lactating dairy cow diets". Animal Science Journal, 88(9): 1346-1351, ISSN: 1740-0929, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/asj.12778., los excesos de cuerpos cetónicos producen toxicidad, y pueden experimentar condensaciones en el hígado y convertirse en β-hidroxi-β-metil-glutaril-CoA, que sirve como fuente de mevalonato (precursor del colesterol formado en exceso). Esto explica los resultados de esta investigación, probablemente por el desbalance energético que tiene lugar al inicio de la suplementación.

Los resultados para el resto de los metabolitos (urea, creatinina, glucosa, triglicéridos, calcio, fósforo, cobre, selenio y magnesio) no mostraron interacción. Al analizar los tres suplementos empleados no se observaron diferencias en su concentración (tabla 4). Esto resulta positivo, pues no hay efectos marcados en los metabolitos por el suministro de los suplementos.

Los valores de urea en sangre oscilaron entre 5.25 y 5.76 mmol L-1, comparables con los informados por Xuan et al. (2018)Xuan, N.H., Loc, H.T. & Ngu, N.T. 2018. "Blood biochemical profiles of Brahman crossbred cattle supplemented with different protein and energy sources". Veterinary World, 11(1): 1021-1024, ISSN: 2231-0916, DOI: https://dx.doi.org/10.14202/vetworld.2018.1021-1024., quienes al evaluar diferentes contenidos de proteína en la dieta refieren 4.46 mmol L-1 en ganado Bos indicus, con peso corporal de 178 ±12.5 kg.

Wang et al. (2018)Wang, C.A., Liu, Q.A., Guo, G.A., Huo, W.J.A., Zhang, Y.L.A., Pei, C.X.A. & Wang, H.C. 2018. "Effects of substituting corn with steam- flaked sorghum on growth, digestion and blood metabolites in young cattle fed feedlot diets". Animal Production Science, 58(2): 299-306, ISSN: 1836-5787, DOI: https://dx.doi.org/http://dx.doi.org/10.1071/AN16265. en bovinos B. taurus, con dieta convencional y peso de 356.4 ± 2.6 kg, probaron una dieta con ensilaje de maíz que aportó 10.66 MJ kg-1 y 12.2 % de PB. Estos autores obtuvieron 4.35 mmol L-1 de urea, valor inferior al que se logró en este estudio, al suplementar con 20 % de P. discolor.

El contenido de creatinina estuvo entre los valores de referencia señalados por Campos et al. (2012)Campos, G.R., García-Alegría, K., Hernández, E.A. & Giraldo-Patiño, L. 2012. "Protein and mineral metabolites for dairy cows during the transition period under tropical conditions". Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 65(2): 6719-6728, ISSN: 2248-7026. para la especie (70.80 a 176.99 mmol L-1). Hubo disminución de 27.17 % a los 15 y 30 d con respecto al inicio (P < 0.0001).

La creatinina es un indicador de la función renal y del catabolismo muscular (Zanferari et al. 2015Zanferari, F., del Valle, T.A., Vendramini, T.H.A., Silva, T.H.D., Rentas, M.F., Gardinal, R. & Rennó, F.P. 2015. Avaliação do uso da creatinina como indicador para estimativas da excreção urinária em vacas leiteiras. Novos desafios da pesquisa em nutrição e produção animal. Ed. 5D. Pirassununga, Sao Paulo, Brasil, ISBN: 978-85-60014-36-1.). Los valores encontrados fueron semejantes a los informados por Kim et al. (2018)Kim, D.H., Choi, S.H., Park, S.K., Lee, S.S. & Choi, C.W. 2018. "Effect of corn grain particle size on ruminal fermentation and blood metabolites of Holstein steers fed total mixed ration". Asian Australasian Journal of Animal Sciences, 31(1): 80-85, ISSN: 1976-5517, DOI: https://dx.doi.org/10.5713/ajas.17.0069., quienes refirieron 82,30 mmol L-1 en ganado B. taurus que consumió una dieta con 17.2 % de PB. De igual manera, resultaron similares al 97.35 mmol L-1 registrado en vacas Holstein con 256 kg de peso corporal, que consumieron dieta integral de ensilaje de maíz y raigrás con 13.4 % de PB.

Con respecto a la glucosa, los valores estuvieron entre 3.79 y 3.74 mmol L-1. Este intervalo se halla en el rango de 2.5-4.16 mmol L-1 indicado por Campos et al. (2004)Campos, R., Carreño, E.S. & Gonzales, F.D. 2004. "Perfil metabólico de vacas nativas colombianas". Revista Orinoquia, 8(2): 32-41, ISSN: 0121-3709. para la raza B. taurus. Las cifras de los triglicéridos se encuentran también en el intervalo de referencia (0 a 1.6 mmol L-1), según señalan Roa et al. (2017)Roa,V.M.L., Ladino, R.E. & Hernández, M.M. 2017. "Indicadores de bioquímica sanguínea en bovinos suplementados con Cratylia argentea y Saccharomyces cerevisiae". Pastos y Forrajes, 40(2): 144-151, ISSN: 2078-8452..

Los valores medios de los minerales estudiados estuvieron en los rangos normales para la especie: 2.42 a 3.09 mmol L-1 para Ca (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.), 1.83 ± 0.50 mmol L-1 para P (Cedeño et al. 2011Cedeño-Quevedo, D.A., Ceballos-Marquez, A., Garzón, C. & Daza-Bolaños, C.A. 2011. "A comparative study of metabolic mineral profiles on dairy farms from two regions in Nariño department". Orinoquia, 15(2): 160-168, ISSN: 0121-3709.) y 9.45 >µg dL-1 para Cu (Rosa 2015Rosa, D.E. 2015. Efecto del cobre durante la maduración de ovocitos bovinos: impacto sobre el desarrollo embrionario preimplantacional. PhD Thesis. Universidad de la Plata, Buenos Aires, Argentina.).

Al analizar los períodos de muestreo (0, 15 y 30 d), se registraron diferencias en la concentración de los metabolitos urea, creatinina, glucosa, triglicéridos, calcio, cobre, selenio y magnesio (tabla 5).

Con respecto a los resultados obtenidos en los metabolitos que estuvieron influenciados por el tiempo de muestreo, se pudo ver que a los 30 d disminuyó la concentración de urea (P < 0.0001) en 39.5 % como promedio, con respecto a los 0 y 15 d (tabla 5). El valor de la urea se encuentra entre las cifras de referencia (3.83 - 9.66 mmol L-1) que citan Guerra et al. (2018)Guerra, M.G., Veras, A.S., Santos, V.L., Ferreira, M.A., Novaes, L.P., Barreto, L.M. & Silva, L.R. 2018. "Perfil metabólico proteico de vacas em lactação alimentadas com milho e ureia a pasto".Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 70(4): 1266-1274, ISSN: 1678-4162, DOI: http://dx.doi.org/10.1590/1678-4162-9677..

El nivel de urea al inicio fue alto en todos los tratamientos. Sin embargo, comenzó a disminuir (P < 0.0001) a partir del día 15 en 32.2 % con respecto al inicio, y el valor más bajo se mostró a los 30 d, con 25.2 y 49.2 % menos en comparación con los 15 d de inicio, respectivamente. Es posible que no existiera una relación proteína/energía adecuada en la dieta base, pues los animales estuvieron en pastoreo con B. decumbens, que reportó un valor bajo de energía (6.36 MJ kg MS-1). Esto hace que aumenten los niveles de amoníaco en rumen por la baja disponibilidad de energía y, por tanto, se incrementan los niveles de urea en sangre (Portilla et al. 2019Portilla, D., Barragán, W., Carvajal, C. & Cajas, Y. 2019. "Estimación de la calidad de la dieta en sistemas silvopastoriles mediante la cuantificación del nitrógeno fecal". Revista Colombiana de Ciencia Animal, 11(1), ISSN: 2027-4297, DOI: https://doi.org/10.24188/recia.v0.n0.2019.691.). De la misma manera, las raciones con bajos niveles de nitrógeno no proteico y proteína degradable en el rumen presentan reducción de la digestibilidad, que disminuye el flujo de proteína microbiana (Carrillo et al. 2018Carrillo, C., Lizandro, G., Cerquera, M., Augusto, C. & Bibiana, O.K. 2018. "Evaluación del parámetro nitrógeno ureico en leche obtenido en un período de siete meses en la Hacienda la Montaña, Antioquia, Colombia". Revista Electrónica de Veterinaria, 19(3): 1-10, ISSN: 1695-7504.).

De acuerdo con Sun et al. (2018)Sun, J., Xu, J., Shen, Y., Wang, M., Yu, L. & Wang, H. 2018. "Effects of different dietary ratio of physically effective neutral detergent fiber and metabolizable glucose on rumen fermentation, blood metabolites and growth performance of 8 to 10-month-old heifers". Asian-Australasian Journal of Animal Sciences, 31(8): 1230-1237, ISSN: 1011-2367, DOI: https://dx.doi.org/https://doi.org/10.5713/ajas.17.0885., el asincronismo en la fermentación de las fuentes de nitrógeno y de energía trae como consecuencia el aumento de la absorción del amoníaco ruminal en el torrente sanguíneo y la conversión a urea en el hígado. Probablemente, esto causó un alto valor biológico al inicio de este experimento. La saturación hepática del exceso de amoníaco ruminal requiere un gasto calórico para los rumiantes de 0.2 Mcal de NL/100 g (Blanchard 1990Blanchard, T., Ferguson, J., Love, L., Takeda, T., Henderson, B., Hasler, J. & Chalupa, W. 1990. "Effect of dietary crude-protein type on fertilization and embryo quality in dairy cattle". American Journal of Veterinary Research, 51(6): 905-908, ISSN: 2639-7315.).

Al comparar los períodos evaluados para glucosa (tabla 5), se encontraron diferencias con incremento (P = 0.0025) en 1.22 veces, al día 30 de iniciada la suplementación, con relación a los 15 d de inicio, que no difirieron entre sí. Al día 30 fue de 3.54, valor superior a los 3.28 mmol L-1 que informaron Akbarian-Tefaghi et al. (2018)Akbarian-tefaghi, M., Ghasemi, E. & Khorvash, M. 2018. "Performance, rumen fermentation and blood metabolites of dairy calves fed starter mixtures supplemented with herbal plants, essential oils or monensin". Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 102: 630-638, ISSN: 1439-0396, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/jpn.12842. en bovinos con 229.9 kg de peso corporal, alimentados con forrajes nativos, con 12.0 % de PB y 72.0 % de NDT, lo que resulta inferior a los 4.75 mmol L-1 que señalan Amirifard et al. (2016)Amirifard, R., Khorvash, M., Forouzmand, M., Rahmani, H.R., Riasi, A., Malekkhahi, M. & Hosseini-Ghaffari, M. 2016. "Performance and plasma concentration of metabolites in transition dairy cows supplemented with vitamin E and fat". Journal of Integrative Agriculture, 15(5): 1076-1084, ISSN: 2095-3119, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/S2095-3119(15)61090-5.. Estos autores estudiaron suplementos con aceites esenciales en una dieta que contenía urea al 19.6 % y 23 g kg-1 de aceite esencial de tomillo. Asimismo, resultan semejantes a los 3.73 mmol L-1 obtenidos en vacas de preparto, suplementadas en el período de transición con una dieta con 14.6 % de PB y 1.55 ENL (Mcal kg-1) (Kekana et al. 2018Kekana, T.W., Nherera-Chokuda, F.V., Muya, M.C. & Manyama, K.M. 2018. "Milk production and blood metabolites of dairy cattle as influenced by thermal-humidity index". Tropical Animal Health and Production, 50(4): 921-924, ISSN: 1573-7438, DOI: https://dx.doi.org/10.1007/s11250-018-1513.).

Los resultados encontrados para la glucosa en este estudio, favorecidos por el tratamiento con P. discolo, indican que esta es fundamental para la producción y liberación de GnRH a nivel hipotalámico. Se ha demostrado que al inhibir la glicólisis a nivel neuronal es menor la frecuencia de los pulsos de LH, producto de una inhibición en la síntesis de GnRH y niveles de IGF-1 (Meléndez y Bartolomé 2017Meléndez, P. & Bartolomé, J. 2017. "Avances sobre nutrición y fertilidad en ganado lechero: Revisión". Revista Mexicana de Ciencias Pecuarias, 8(4): 407-417, ISSN: 2448-6698, DOI: http://dx.doi.org/10.22319/rmcp.v8i4.4160.).

El valor de triglicéridos disminuyó (P = 0.0001) en 19.14 % como promedio, a los 15 y 30 d en comparación con el inicio. Esto se pudo corroborar en el tratamiento con T. gigantea en el dia 30. Los resultados hallados son semejantes a los informados por Nemati et al. (2015), con valores de triglicéridos de 0.21 a 0.30 mmol L-1, al medir el efecto de la dieta con 19.2 % de PB, 2.82 de EM (Mcal kg-1) y 12.5% de alfalfa (Medicago sativa). Son también similares a los de Roa et al. (2017)Roa,V.M.L., Ladino, R.E. & Hernández, M.M. 2017. "Indicadores de bioquímica sanguínea en bovinos suplementados con Cratylia argentea y Saccharomyces cerevisiae". Pastos y Forrajes, 40(2): 144-151, ISSN: 2078-8452., quienes señalaron 0.68 mmol L-1 en bovinos suplementados con 3.5 kg de Cratylia argentea, y al de 0.52 mmol L-1 que reportaron Galvis et al. (2017)Galvis, R.D., Madrid, L.V. & Ramírez-Vásquez, N. 2017. "L-carnitine supplementation descreases hepatic triglyceride 8 accumulation in Holstein cows during the transition period". Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, 32(3): 166-174, ISSN: 0120-0690, DOI: http://dx.doi.org/10.17533/udea.rccp.v32n3a01. en una suplementación con 16.8 % de PB y EE de 5.72 % para vacas en preparto.

En este experimento, los valores fueron superiores al inicio de la suplementación. Es posible que el incremento de nutrientes como fuentes de energía provocara la movilización de triglicéridos, por efecto del almacenamiento de grasa en el animal, con una disminución de los valores (Ntallaris et al. 2017Ntallaris, T., Humblot, P., Båge, R., Sjunnesson, Y., Dupont, J. & Berglund, B. 2017. "Effect of energy balance profiles on metabolic and reproductive response in Holstein and Swedish Red cows". Theriogenology, 90: 276-283, ISSN: 0093-691X, DOI: https://dx.doi.org/10.1016/j.theriogenology.2016.12.012.).

Los valores encontrados para los microminerales cobre y selenio, y magnesio estuvieron influenciados por el aporte de las forrajeras, de acuerdo con su composición química, y por la adición de 1 % de la premezcla de vitaminas y minerales en el suplemento, lo que pudiera explicar los resultados obtenidos.

En el caso de minerales como el fósforo, no se mostró variación con el tiempo de suplementación. El calcio disminuyó 25.7 % (P < 0.0001) como promedio, en los 15 y 30 d, que no difirieron entre sí en comparación con el inicio, y el cobre lo hizo en 17 %, en los días 15 y 30, que sí difirieron. La normocalcemia se relaciona con el ingreso adecuado del catión y el buen funcionamiento del mecanismo homeostático. En un estudio realizado con suplementación de 9.7 % de PC y 58.2 % de NDT se anunciaron valores de Ca de 2.61 mmol L-1 (Asano et al. 2017Asano, K., Ishida, M. & Ishida, M. 2017. "Effects of inclusion levels of pelleted silvergrass (Miscanthus sinensis Andress) in the diet on digestibility, chewing activity, ruminal fermentation and blood metabolites in breeding Japanese Black cows". Animal Science Journal, 88(April 2016): 468-475, ISSN: 1740-0929, DOI: https://dx.doi.org/10.1111/asj.12665.).

Los resultados para el cobre estuvieron por debajo de los informados por Campos et al. (2012)Campos, G.R., García-Alegría, K., Hernández, E.A. & Giraldo-Patiño, L. 2012. "Protein and mineral metabolites for dairy cows during the transition period under tropical conditions". Revista Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 65(2): 6719-6728, ISSN: 2248-7026. en novillas Taurus mestizas, con valores de 9.38 mmol L-1. Por tanto, en los días 0 y 15, los valores estuvieron en el rango de normocupremia, que es mayor a 9.45 mmol L-1 (Fazzio 2010Fazzio, L.E. 2010. Caracterización de terneros de cría con hipocuprosis. PhD Thesis. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, Buenos Aires, Argentina.). Es de destacar que, a pesar de que no se encontraron diferencias entre los tratamientos, esto puede indicar que hubo una leve deficiencia de cobre.

Lo anterior pudiera fundamentar la insuficiencia de cobre, pues el efecto de la proteína en la dieta acelera la acción de los microorganismos del rumen, lo cual origina la formación de sulfatos. Estos se unen al hierro propio de los suelos, que en esta zona del pie de monte amazónico se halla en exceso, y se forma el sulfuro de hierro, el cual según informes de Arthington y Brown (2005)Arthington, J.D. & Brown, W.F. 2005. "Estimation of feeding value of four tropical forage species at two stages of maturity". Journal of Animal Science, 83(7): 1726-1731, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.2527/2005.8371726x. disminuye la absorción del cobre a nivel ruminal.

Se ha señalado que este elemento se relaciona con la síntesis y secreción de las gonadotropinas, al modular la capacidad de liberación de la hormona luteinizante (Garrik et al. 2003Garrik, M.D., Nuñez, M.T., Olivares, M. & Harris, E.D. 2003. "Parallels and contrasts between iron and copper metabolism". BioMetals, 16(1): 1-8, ISSN: 1572-8773, DOI: https://doi.org/10.1023/A:1020735401734. y Michaluk y Kochman 2007Michaluk, A. & Kochman, K. 2007. "Involvement of copper in female reproduction". Reproductive Biology, 7(3): 193-205, ISSN: 1642-431X.). De esta manera, las estrategias de nutrición con oligoelementos para novillas en crecimiento pueden determinar, en última instancia, el rendimiento durante su desempeño productivo y reproductivo (Yatoo et al. l 2013Yatoo, M.I., Saxena, A., Deepa, P.M., Habeab, B.P., Devi, S., Jatav, R.S. & Dimri, U. 2013. "Role of trace elements in animals: a review". Veterinary World, 6(12): 963-967, ISSN: 2231-0916.). Este último aspecto se debe tener en cuenta para incluir este mineral en los programas de suplementación e incorporar sistemas arbóreos para mejorar las condiciones de los suelos de la amazonía (Ramírez-Iglesias et al. 2020Ramírez-Iglesias, E., Cuenca, K. & Quizhpe, W. 2020. "Manejo integrado de agroecosistemas en América Latina: Una opción para maximizar la producción resguardando la biodiversidad". Tekhné, 23(1): 1-11, ISSN: 1316-3930.), lo que justifica los niveles bajos encontrados en esta investigación.

Para el selenio, los valores se incrementaron, como promedio, en 18.75 %, a los 15 y 30 d en comparación con el inicio. En todos los casos, estuvieron en el rango de los valores de referencia informados por Ceballos et al. (1999)Ceballos A.F., Wittwer, P., Contreras, E., Quiroz, H. & Böhmwald, H.L. 1999. "Actividad de glutation peroxidasa en bovinos lecheros a pastoreo correlacionada con la concentración sanguínea y plasmática de selenio". Pesquisa Agropecuária Brasileira, 34(12): 2331-2338, ISSN: 1678-3921, DOI: https://doi.org/10.1590/S0100-204X1999001200020., entre 0.06 y 1.24 µmol L-1. Con respecto al magnesio, se mostró disminución del 37.97 % en el día 15, con relación a los valores del inicio y día 30, que no difirieron entre sí, y se hallan entre los valores de referencia, de 0.74 a 0.95 mmol L-1 (Kaneko et al. 2008Kaneko, J.J., Harvey, J.W. & Bruss, M.L. 2008. Carbohydrate metabolism and its diseases. Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Ed. Academic Press. San Diego, California, pp. 46-80.).

Estos resultados se podrían comparar con los informados por Kang et al. (2017)Kang, H.J., Lee, I.K., Piao, M.Y., Gu, M.J., Yun, C.H., Kim, H.J., Baik, M. 2016. "Effects of Ambient Temperature on Growth Performance, Blood Metabolites, and Immune Cell Populations in Korean Cattle Steers". Asian Australasian Journal of Animal Science, 29(3): 436-443, ISSN: 1976-5517, DOI: http://dx.doi.org/10.5713/ajas.15.0937., quienes declararon valores de 0.82 a 1.03 mmol L-1 de Mg, al suplementar por 90 d antes del servicio, lo que provoca mayores índices de preñez, según refieren Irabuena et al. (2016)Irabuena, O., Sterla, S., Fernández Abella, D., Betancur, S., Capdevielle, L. & Ferreira, A. 2016. Efecto de la suplementación con selenio sobre el desempeño reproductivo de vacas de segunda cría. 39º Congreso Argentino de Producción Animal, Facultad de Veterinaria UDELAR, Universidad de la República, Salto, Uruguay.. En efecto, los valores encontrados para este mineral pueden conducir a la disminución de la fertilidad en la hembra bovina por efecto de la mortalidad embrionaria en el primer tercio de la gestación (Abbott et al. 2019Abbott, C.R., Payton, R.R., Edwards, J.L., Russell, J.R., Smith, J.K. & Pohler, K.G. 2019. "Effect of complexed trace minerals on cumulus-oocyte complex recovery and in vitro embryo production in beef cattle". Journal of Animal Science, 97(4): 1478-1490, ISSN: 1525-3163, DOI: https://doi.org/10.1093/jas/skz005.).

La sustitución de 20 % del suplemento convencional por P. discolor o T. gigantea no afectó los indicadores sanguíneos estudiados. Sin embargo, el incremento en el tiempo de suplementación mejoró los indicadores sanguíneos de triglicéridos, urea, creatinina y selenio. Así, la suplementación con 20 % de inclusión de P. discolor mantuvo los niveles de colesterol estables y mejoró los niveles de glucosa en los 30 d de suplementación. Es una opción viable para mantener un estatus nutricional en novillas Harton del Valle, en las condiciones de alimentación en pastoreo en el pie de monte amazónico.